膵管癌におけるNecl-4の関連miRNAの解明と新規診断・治療への応用

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K15099
• Research Institution: Tokai University
• Principal Investigator: 川西 彩 東海大学, 医学部, 助教 (40773114)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 膵臓 / 膵管癌 / Necl-4 / miRNA / miRNA mimic

Outline of Annual Research Achievements

応募者はこれまで細胞間接着分子のひとつであるNecl-4の膵管癌での発現について検討を行ってきた。その結果、Necl-4の発現が低下する膵管癌は予後不良で高悪性度であることを明らかにし報告した。本研究ではこれまでの研究を発展させ、Necl-4の発現を制御するmicro RNA (miRNA)の発現と機能について検討することを計画した。
2018年度では、Necl-4の発現制御に関わるmiRNAをマイクロアレイにより網羅的に探索した。その結果、コントロール細胞と比較しNecl-4ノックダウン細胞では81個のmiRNAで2倍以上の発現亢進および123個で2倍以上の発現低下がみられた。統計学的解析の結果、発現亢進miRNAの1個、発現低下miRNAの7個がコントロール細胞よりもNecl-4ノックダウン細胞で有意な発現亢進または発現低下をしていることを同定した。
2019年度では、マイクロアレイで同定したmiRNAが、Necl-4を標的とするmiRNAかどうかTargetScan (http://www.targetscan.org/vert_72/)で検索を行った。その結果、マイクロアレイで発現亢進していた1個のmiRNA、発現低下していたmiRNA7個のうち1個がNecl-4を標的とすることが予想された。その2個のmiRNAを対象に、膵癌培養細胞を用い以下の検討を行った。
対象とするmiRNAを模倣したmiRNA mimicを膵癌細胞Miapaca 2にトランスフェクションし、miRNAを含むtotal RNAを抽出した。抽出したtotal RNAを用いRT-qPCRを行いnecl-4の発現を検討した。その結果、necl-4ノックダウン細胞で発現亢進していたmiRNAがNecl-4の発現を抑制することを明らかにした。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

研究体制の変更等により研究はやや遅れている。

Strategy for Future Research Activity

今後は、RT-PCRに加えwestern blotやルシフェラーゼアッセイにより対象とするmiRNAがnecl-4を発現抑制するか確認する。また、膵癌切除切片上での対象miRNAの発現についてin situ hybridizationやRT-qPCRを用い検討を行う。