2018 Fiscal Year Research-status Report
EBV感染が核や細胞質で誘導するAPOBEC3sの協調的な上皮細胞腫瘍化の研究
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18K15168
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| Research Institution | Shimane University |
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Principal Investigator |
金廣 優一 島根大学, 学術研究院医学・看護学系, 助教 (60609197)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | EBV / APOBEC3 / ミトコンドリア |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Epstein-Barr ウイルス（EBV）は、Bリンパ球や上皮細胞に持続感染し、上咽頭がんや胃がんを形成する。しかし、ウイルス感染から腫瘍形成にいたるまでの分子機構は不明な部分が多い。我々は以前の研究で、EBV感染上皮細胞でDNA編集酵素APOBEC3ファミリーの発現が上昇することと、EBV感染上皮細胞でミトコンドリアゲノムに変異が増加することに気づいた。そこで、EBV感染で誘導される、APOBEC3sが引き起こす宿主DNAやミトコンドリアDNA(mtDNA)の変異導入が、腫瘍形成に果たす役割を明らかにすることを目的とした。APOBEC3ファミリー(A3A, A3B, A3C, A3D, A3F, A3G, A3H)を胃上皮細胞株AGSに過剰発現した後、ゲノムへの変異導入を3D-PCRで検出した。また、ゲノム編集法を用いたAPOBEC3欠損株を樹立し、EBV感染後のゲノム変異導入も検出した。APOBEC3Cの過剰発現は、mtDNAに高頻度な変異を導入した。APOBEC3C欠損変異株にEBVを感染させてもmtDNAに変異は導入されなかった。またAPOBEC3C欠損変異株にEBVを感染させた後に、ミトコンドリア由来活性酸素分子種（mtROS）の産生は野生株と比較して遅延した。胃上皮細胞においてAPOBEC3CはEBV感染におけるmtDNA変異に重要なであり、mtDNA変異はミトコンドリア機能障害や腫瘍形成の原因となるかもしれない。今後、抗APOBEC3C抗体を用いたChIP-Seqを行い、APOBEC3Cの標的遺伝子を明らかにする。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
細胞融合法によるEBV感染細胞由来のミトコンドリアの移植実験に時間がかかっていることや、本研究以外のテーマの論文化に向けて研究時間の多くを割いていたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
EBV感染細胞由来ミトコンドリアを細胞融合法を用いて、非感染細胞への移植し、細胞増殖能（MTT assay）、運動能（wound healing assay）、転移能（migration assay）、およびアポトーシス 感受性について検討する。また、抗APOBEC3C抗体を用いたChIP-Seqを行い、APOBEC3Cの標的遺伝子を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
細胞融合法によるEBV感染細胞由来のミトコンドリアの移植実験に時間がかかっていることや、本研究以外のテーマの論文化に向けて研究時間の多くを割いていたため、ChIP-Seqを行う段階に到達しなかった。生じた次年度使用予算は、ChIP-Seqに使用する。
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