2018 Fiscal Year Research-status Report
エンドソーム局在型ユビキチンE3リガーゼによる血管新生制御の分子機構
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18K15244
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| Research Institution | Ehime University |
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Principal Investigator |
前川 大志 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 助教 (10771917)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 細胞内膜輸送 / 血管新生 / 初期エンドソーム / ユビキチン化基質タンパク質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
血管新生に必須な接着分子integrin β1の細胞内膜輸送経路を制御するCUL3型ユビキチンE3複合体足場タンパク質ANKFY1の基質タンパク質を同定するために、愛媛大学が保有するヒト2万リコンビナントタンパク質アレイに対してアルファスクリーン結合アッセイスクリーニングを実施した。その結果、ネガティブコントロールの10倍以上のシグナルを結合陽性とした所、結合陽性と判定できたタンパク質は同定されなかった。そこで次に、狙い撃ちで膜輸送関連分子群との結合アッセイをアルファスクリーンを用いて実施した。その結果、複数のANKFY1結合タンパク質の同定に成功することに成功した。当該ANKFY1結合タンパク質のうち、細胞内膜輸送に関与する分子に絞って、ヒト臍帯血静脈血管内皮細胞で解析を進めた。その結果、１つの分子に関して、その過剰発現によって、初期エンドソームの形態が異常になり、integrin β1の細胞内局在が異常になる事を見出した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画通り、ANKFY1の結合タンパク質同定に成功したため。
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| Strategy for Future Research Activity |
2018年度に同定したANKFY1結合タンパク質が、実際にANKFY1依存的にユビキチン化を受けるかを、in vitro及び、細胞レベルでユビキチン化アッセイを行い、検証する。結合タンパク質探索に関しては、質量分析法を用いて更なる解析を進める。また、当該結合タンパク質の過剰発現、発現抑制によって、接着分子integrin β1の細胞内局在や血管新生に異常が生じるかを調べる。Ub化部位に関しては、質量分析を用いて同定を試みる。ANKFY1と当該結合タンパク質との結合を阻害する化合物探索のためのスクリーニング実施の準備を行う。具体的には、ハイスループットスクリーニングに耐えうるアルファスクリーンによる結合検出系の系を構築する。
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[Journal Article] SNX9 determines the surface levels of integrin β1 in vascular endothelial cells: Implication in poor prognosis of human colorectal cancers overexpressing SNX9.2019
Author(s)
Tanigawa K, Maekawa M, Kiyoi T, Nakayama J, Kitazawa R, Kitazawa S, Semba K, Taguchi T, Akita S, Yoshida M, Ishimaru K, Watanabe Y, Higashiyama S.
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Journal Title
J Cell Physiol.
Volume: in press
Pages: in press
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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