2019 Fiscal Year Research-status Report
急性脳症の早期診断と治療に向けた血液・髄液microRNA解析
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18K15700
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
星野 愛 東京大学, 大学院医学系研究科(医学部), 助教 (90801928)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 急性脳症 / microRNA / けいれん重積型急性脳症 / 急性壊死性脳症 / 難治頻回部分発作重積型急性脳炎 / 熱性けいれん / けいれん性疾患 / 早期診断バイオマーカー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究はけいれん重積型急性脳症を含む「急性脳症」と、熱性けいれんなどの比較的予後良好の「けいれん性疾患」を発症早期に区別する低侵襲性バイオマーカー探索を目的とし、Cell-free miRNAに着目して両群間の血清/髄液中の各miRNAの発現比較検討を進めている。今年度は研究代表者が所属する東大発達医科学と連携研究施設（東京都医学総合研究所 脳発達・神経再生研究分野 こどもの脳プロジェクト）との共同研究体制で広く急性脳症亜群である難治頻回部分発作重積型急性脳炎（AERRPS）および対照群（けいれん性疾患）の血清を用いてmiRNA Isolation KitでRNAを抽出後、逆転写反応させcDNA化し、ミクログリア関連の中枢性炎症に関連、または脳梗塞の早期バイオマーカーとして報告されている複数の候補miRNA（miR-146a, -146b, -155, -233, -125a, -125b, -143, -21）を選択し、Real-time PCRで定量解析を行った。解析データは比較Ct法で３つのリファレンスmiRNA（Ce-miR-39_1, miR-15b, SNORD61）を用いて両群間の各miRNA発現を比較した。現時点の研究結果としてはCe-miR-39_1の補正によるmiR-125aがAERRPS群で有意に上昇していた（p=0.028）。また、miR-15b, SNORD61の補正による解析においてもmiR-125aが疾患群で高発現の傾向がみられた。現在はPathway miRNA arrayを用いたより網羅的なmiRNAの発現検討や、解析に用いるリファレンス遺伝子の再検討を進めている。また多施設の協力を得てAERRPS以外の他の急性脳症症候群の血清・髄液の集積も進めており、今後は症候群別の発現の相違についても検討を進める予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度は候補miRNA（miR-146a_1, miR-146b_1, miR-233, miR-125a_1, miR-125b_1, miR-21_1 等）におけるPCR定量解析とComparative CT法を用いた両群間の発現比較検討を進めた。またPathway miRNA arrayを用いたより網羅的なmiRNAの発現比較を進めるための一連の実験条件はほぼ確立した。症例・対照群の血清を用いたより網羅的な発現解析を継続し、また血清に恒常的に安定発現するリファレンス遺伝子の再検討も進めている。またAESD含めた他の急性脳症群に対するサンプル集積も整いつつあり、今後も広く症候群別においても有用なmiRNAをターゲットとしたバイオマーカー探索研究を深めていく準備が整っている。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度も継続してAERRPS群と対照群の試料を用いてより網羅的なmiRNAについての検討を深め、他の急性脳症群の急性期試料（血清・髄液）への発現実験を実施する方策である。
①Pathway miRNA arrayを用いたより網羅的なmiRNAの発現比較
②集積したAESD群および対照群の血清・髄液を用いたcell-free RNA抽出と、複数の候補miRNAまたはPathway miRNA arrayを用いたPCR定量解析および両群での発現比較検討。
③Bio-Plexシステムを用いた血清・髄液サイトカイン解析測定を検討し、miRNA発現にCo-factorとしてサイトカインが関連するか比較検討。
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| Causes of Carryover |
今年度は検体集積継続と血清miRNA解析の候補miRNAおよび網羅的Pathway miRNA array解析の一連の実験条件検討を進めた。今年度、AESDなどの急性脳症群、対照群のサンプル数・量が解析目標サンプル数に満たなかったため、miRNA発現解析やBio-Plexシステムを用いた血清・髄液サイトカイン発現解析の試行は次年度以降に実施するように再計画した。そのため次年度使用額が生じた。次年度に引き継いだ差引額は、次年度に同解析に使用予定である。
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| Remarks |
東京大学大学院医学系研究科発達医科学 ホームページ
http://www.development.m.u-tokyo.ac.jp/
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[Journal Article] Thermolabile polymorphism of carnitine palmitoyltransferase 2: A genetic risk factor of overall acute encephalopathy.2019
Author(s)
Shibata A, Kasai M, Hoshino A, Miyagawa T, Matsumoto H, Yamanaka G, Kikuchi K, Kuki I, Kumakura A, Hara S, Shiihara T, Yamazaki S, Ohta M, Yamagata T, Takanashi JI, Kubota M, Oka A, Mizuguchi M.
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Journal Title
Brain Dev.
Volume: 41
Pages: 862-869
DOI
Peer Reviewed
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