2018 Fiscal Year Research-status Report

NASHに対する胆汁酸受容体TGR5の活性化と既存薬剤を応用した新規治療法の開発

Research Project

Project/Area Number	18K15824
Research Institution	Nara Medical University
Principal Investigator	賀屋大介奈良県立医科大学, 医学部附属病院, 研究員 (70812501)
Project Period (FY)	2018-04-01 – 2021-03-31
Keywords	liver fibrosis / TGR5 / DPP4 / diabetes mellitus
Outline of Annual Research Achievements	糖尿病自然発症ラットであるOLETFにおいて16週齢から8週間にわたりブタ血清投与群、ブタ血清を腹腔内投与しながら、TGR5アゴニスト単独、DPP4阻害薬単独、両薬剤併用の群で比較するとHOMA-RやQUICKIなどの耐糖能の指標は治療群で有意に改善しており、collagen1A1、などの線維化マーカーのmRNA発現の抑制傾向は確認できたが肝線維化については組織学的な効果は明らかな差は見いだせなかった。ブタ血清による線維化誘発効果が強すぎたためと考えられ、耐糖能異常がしっかりと発現する20週齢から4週間の実験を行うことで再評価したところ、組織学的にも治療群で有意に改善し、両薬剤併用でさらに効果が増強されることが判明した。fibronectin、collagen1A1などの線維化マーカーの発現も抑えられていた。OLETFに自然に認められる肝脂肪化も治療群で有意に改善しており、TBARSアッセイで評価するとMDAについてはブタ血清投与群で有意に上昇しており、治療群ではそれが有意に改善しており、酸化ストレスは治療群で有意に改善していた。今回のモデルにおいて肝線維化、肝脂肪化、耐糖能の改善を認めており、メタボリックシンドロームを合併する肝線維化病態において、今回の薬剤治療法は効果的である可能性が示唆される。また、TGR5アゴニストは多面的な作用があることが報告されており、それについて今後さらに精査していく方針である。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 動物実験においては一度施行した実験では遺伝子発現レベルでは改善を認めたものの、表現型としては明らかは有意差を見いだせず、再度実験を行うこととなった。糖尿病自然発症ラットの供給の問題上、再実験の開始には時間を要したがその後の実験は順調に進行しており、全体としてはおおむね順調に進展している。
Strategy for Future Research Activity	今後はvitro実験において、活性化肝星細胞を用いた実験や小腸L細胞様細胞などを用いて、今回の動物実験での結果の原理の追及、裏付けを行っていく。TGR5アゴニストと胆汁酸の関係については腸内細菌叢との関連も示唆されており、動物実験においての腸内細菌叢の変化についても次世代シークエンサーを用いた解析などで精査していく方針である。
Causes of Carryover	次年度に使用するELISAキットなどの購入や、現在結果待ちである次世代シークエンサーでの細菌叢解析のためのコストがかかってきたため次年度使用額が生じたと考えられます。今後も進捗状況をみながら適切に使用していく所存です。