Development of immunological test using recombinant antigen for diagnosis of bird-related hypersensitivity pneumonitis.

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K15920
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 白井 剛 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助教 (00796617)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: 過敏性肺炎 / 鳥抗原 / 抗原タンパク / 特異抗体

Outline of Annual Research Achievements

過敏性肺炎の一種である鳥関連過敏性肺炎は、ハトを含む鳥類のフンや羽毛の吸入により生じるが、血清中の鳥由来抗原に対する特異抗体の検出や、患者特異的な免疫応答を評価するための免疫学的検査は、これまでハトフンや血漿などの粗抗原を使用していたことから標準的な方法が存在しなかった。
過敏性肺炎の中でも慢性に肺の線維化を生じる病型（慢性型）では他の肺線維化を来す疾患との弁別が臨床経過や画像所見からは困難な場合が多く、過敏性肺炎の頻度高い原因抗原である鳥抗原への特異抗体の有無をスクリーニングすることが重要であり、国際的なガイドライン等でも明記されている。
本研究は、申請者らが明らかにしたハトフン、血清に共通して含まれる原因抗原タンパクであるハトIGLL-1（Immunoglobulin lambda-like polypeptide-1）を標準化抗原とした、鳥関連過敏性肺炎の診断に寄与する検査方法の確立を目標とし、まずsandwich ELISA法による血清中のハトIGLL-1に対する特異抗体（IgG）量の測定系を確立を目指し、昨年度、大腸菌発現系を用いたハトIGLL-1のリコンビナントタンパク精製を行い、十分な抗原量を確保した。現在、ELISAの条件検討を行っており、最適条件が決まり次第、鳥関連過敏性肺炎患者（急性型29例、慢性型46例）、対象疾患患者64例、健常者146例で比較を行う予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

鳥関連過敏瀬肺炎の原因抗原タンパクであるハトIGLL-1のリコンビナントタンパクを精製し、現在、患者、対照疾患患者、健常者血清中のリコンビナントタンパクに対する特異的IgG抗体測定を行っている。

Strategy for Future Research Activity

ハトIGLL-1リコンビナントタンパクに対する血清特異的IgG抗体の検出系の検討を行う（現在進捗中）。ハトIGLL-1リコンビナントタンパクを添加抗原とした患者末梢血単核球を用いたリンパ球刺激試験を行い、細胞性鳥関連過敏性肺炎の診断方法の確立をめざす。さらにリコンビナントタンパクを使った過敏性肺炎の疾患マウスモデルを作成し、過敏性肺炎の病態解明を行う。

Causes of Carryover

2019年度に大腸菌発現系を用いて抗原（ハトIGLL-1）のリコンビナントタンパクを作製、患者、対照疾患患者、健常者血清中の抗原特異的抗体の測定を行っている。測定にあたり適宜リコンビナントタンパクを追加して精製しているが、当初の予想よりもタンパク量が少なく済み、精製に計上していた費用で未使用額が生じた。

Research Products

• [Journal Article] Screening and diagnosis of acute and chronic bird-related hypersensitivity pneumonitis by serum IgG and IgA antibodies to bird antigens with ImmunoCAP. (2021)
  • Author(s): Tsuyoshi Shirai, Yoshinori Tanino, Takefumi Nikaido, Yotaro Takaku, Seishu Hashimoto, Yoshio Taguchi, Tomohisa Baba, Takashi Ogura, Kensuke Kataoka, Masayuki Nakayama, Yoshihito Yamada, Sayomi Matsushima, Satoshi Nakayama, Yasunari Miyazaki.
  • Journal Title: Allergology International. Volume: 70 Pages: 208-214.
  • DOI: 10.1016/j.alit.2020.09.003
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research