2019 Fiscal Year Research-status Report
The Role of Blood Fibrinolytic Factor Plasmin Activity in Manipulating Macrophage-mediated Mechanisms of Atherosclerosis Promotion
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18K16081
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
宮嶋 ちはる 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(薬学), 助教 (40770798)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | マクロファージ / 動脈硬化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
当研究室ではヒトⅡa型家族性高脂血症モデルマウスであるLDL受容体およびRNA編集酵素APOBEC1のダブル欠損マウスLdlr-/-/Apobec1-/-）を用いて動脈硬化の発症メカニズムについて検討を行っている。Plg遺伝子を欠損したLdlr-/-/Apobec1-/-/Plg-/-欠損マウスはLdlr-/-/Apobec1-/-マウスに比べLDL-Cの上昇が認められるが、動脈硬化の形成が抑えられていた。またマクロファージ（Mφ）によるOxLDL取り込みは Plgの存在下で上昇し、Plg活性化体Plmの阻害剤の存在下で抑制された。以上からMφにおけるLDL取り込みはPlmを介して制御されていることが明らかになった。さらに、Plg/PlmがMφによるOxLDL取り込みの主役であるスカベンジャー受容体（SR）の発現を介してMφの機能を制御するか解析を進めた。主要なSR(CD36、CD204)を中心に、両マウスの腹腔及び骨髄由来MφからmRNAを抽出し、Plgによる遺伝子発現の影響を検討したところ、骨髄由来Mφ、及び、腹腔由来Mφにおいても、PlgによるSR遺伝子発現に影響は認められなかった。そこで、本年度は、さらにPlg/Plm活性化メカニズムが動脈硬化の形成に及ぼす影響ついて解析を進めるため、Plg-RKT欠損マウス、uPA酵素活性欠損マウス、及びSRのCD36欠損マウスの作製を中心に行った。Plg-RKT欠損マウス、uPA酵素活性欠損マウスはバッククロスが終了し、来年度から高脂血症に注目し病態解析を行っていく。引き続き、Plg/Plmシステムに注目し、Mφの泡沫化の制御について詳細なメカニズを明らかにし動脈硬化の治療や制御の解明に大きく貢献する。また Ldlr-/-/Apobec1-/-マウス由来のCD36ノックアウトマウスは現在、遺伝子改変の有無を確認中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は、Plg/Plm活性化メカニズムが動脈硬化の形成に及ぼす影響ついて解析を進めるため、Plg-RKT欠損マウス、uPA酵素活性欠損マウス、及びSRのCD36欠損マウスの作製を中心に行った。バッククロスが完了したPlg-RKT欠損マウスの腸間膜リンパ節よりタンパクを抽出し、Plg-RKTのタンパク発現の確認をウェスタンブロット解析によって行った。野生型マウスにおいて発現が確認されたPlg-RKTタンパクは、Plg-RKT欠損マウスにおいて発現が抑制されていることが明らかになった。Plg-RKT欠損マウス、uPA酵素活性欠損マウスを用いた解析を行い、新たな知見を得られることが期待できる。
また、Plg/PlmがMφによるOxLDL取り込みの主役であるスカベンジャー受容体（SR）の発現を介してMφの機能を制御するか解析を進めるため、主要なSRであるCD36欠損マウスを作成中である。新規遺伝子改変マウス作製方法であるiGONAD (improved-Genome editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery) 法とゲノム編集技術CRISPR/Cas9システムを組み合わせ、Ldlr-/-/Apobec1-/-マウスを用いてCD36欠損マウスの作製を試み、現在、樹立中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
昨年度の結果より、両マウスの腹腔及び骨髄由来MφからmRNAを抽出し、Plgによる遺伝子発現の影響を検討した。Plgの遺伝子型の影響を検討した骨髄由来Mφ、腹腔由来Mφにおいて、PlgによるSR遺伝子発現に影響は認められなかった。PlgがSR遺伝子発現に影響しないことが明らかになり、PlgがMφ上のSRタンパク発現に影響しているか、もしくはリガンド側であるLDLに影響し取り込み能を促進している可能性示唆された。本年度はさらに解析を進めるための、Plg-RKT欠損マウス、uPA酵素活性欠損マウス、及びCD36欠損マウスの作製に成功し、順調に、PlgによるMφの機能制御メカニズが明らかにする準備ができている。来年度は、PlgのSRのタンパク発現やLDL側への影響を検討することで、Plg/PlmによるMφの泡沫化の制御について詳細なメカニズを明らかにし動脈硬化の治療や制御の解明に大きく貢献する。また、Plg/Plm活性化システムが動脈硬化の形成に及ぼす影響を解明するため、Ldlr-/-/Apobec1-/-/Plg-RKT-/-マウスを用いて高脂血症や動脈硬化の表現系を解析することによって新規Plg受容体のMφ機能制御や動脈硬化への貢献を明らかにできる。
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