2019 Fiscal Year Research-status Report
レプトスピラが宿主の脂肪組織血管内に定着する分子機構の解明
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18K16174
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| Research Institution | Tottori University |
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Principal Investigator |
尾鶴 亮 鳥取大学, 医学部, 助教 (70763035)
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2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | レプトスピラ / レプトスピラ症 / ワイル病 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
今年度は、昨年度得られた遺伝子組換えレプトスピラM1株、M2株に関する解析を行った。
M1株、M2株はトランスポゾンによるランダム挿入変異体であり、共に同一の鞭毛構造に関する遺伝子Aにトランスポゾンの挿入が起こっている変異体である。しかし遺伝子A内での挿入位置が異なり、その結果感受性動物であるハムスターへの病原性が異なることが示された。遺伝子Aがコードするタンパクは336a.a.（アミノ酸）であり、C末端側にはペプチドグリカンを結合するためのOmpA-like domainが存在しており、これによって鞭毛構造物を菌体に固定していると考えられる。またシグナル配列を持ち外膜に局在していると考えられているが、レプトスピラ属細菌以外でAと相同性の高いタンパクは見つかっておらず、実際の機能や局在は不明である。M1株、M2株での遺伝子Aのコードするタンパクはそれぞれ167a.a.、26a.a.となっており、特にOmpA-like domainはM1株、M2株共に欠損しているため通常の機能は果たしていないと考えられる。しかし一見機能欠損の大きいM2株の方で病原性低下は見られず、M1株で病原性の低下が起こっていることから、遺伝子Aは機能的に存在せずともレプトスピラの生育に影響はないが、OmpA-like domainを欠く状態で26a.a～167a.a.間に存在する未知のドメインが存在することで病原性の低下を招いていることになる。
またA直下には2価イオン排出ポンプBが存在しており、トランスポゾンの挿入がBの発現にも作用している可能性があった。そこでZn2+イオンを添加した状態でM1株、M2株、野生型L495株を培養すると、M1株、M2株共に増殖速度が低下した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
今年度は2019年10月～12月において、鳥取大学医学部動物実験施設感染区域において工事が行われたため、その期間動物実験を進めることができなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
M1株、M2株感染ハムスターの病理学的解析を行う。特に経皮感染時の皮下脂肪組織での定着様式を形態学的に解析し、増殖速度をqPCRを用いて定量する。またトランスポゾンの挿入が起こっている鞭毛関連遺伝子A、その直下に存在する2価イオン排出ポンプ遺伝子Bのレプトスピラでの機能や遺伝子発現、病原性に関する解析を行い、M1株とM2株で起こっている病原性の変化について詳細に検討を行う。
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| Causes of Carryover |
今年度は2019年10月～12月において、鳥取大学医学部動物実験施設感染区域の工事が行われたため、その期間動物実験を進めることができなかった。
次年度はこの期間に行うはずであった動物実験を行い、その動物購入費用・飼育料として使用する。
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