新規NASH誘導モデルマウスを用いたGPR43によるNASH発症抑制の検討

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K16238
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 花谷 聡子 熊本大学, 医学部附属病院, 医員 (60814762)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 短鎖脂肪酸 / 脂肪肝

Outline of Annual Research Achievements

本研究では、新たに開発したNASHモデル動物を用いて動物実験を実施する。NASHモデル動物は、6週齢の雄性C57BL/6マウスにgold-thioglucose（GTG） 0.2mg/kgを腹腔内投与することで過食を誘発し、さらに高脂肪高ショ糖食（HF/HSD）による飼育を行うことによって作成する。肥満、インスリン抵抗性に加え、肝における脂肪沈着、肝細胞の風船様腫大、炎症と線維化の出現を認めた場合NASH発症と判断する（Matteoni分類による組織学的評価）。
GTG投与群では非投与群と比較して過食、体重増加を認め、HF/HSD投与にてさらに体重増加の加速を認めた。GTG投与＋HF/HSD投与にて明らかなインスリン抵抗性の出現も認め、投与開始24週間後のマウスにおいてNASH発症（肝における脂肪沈着、肝細胞の風船様腫大、炎症と線維化の出現）を確認した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

NASHモデル動物の作成が予定していたよりも遅れてしまったため、計画が全体的に遅れている。GTG投与後の過食誘導などが上手くいかない個体を認めておりGTG投与量の調整を行っている。また、24週間と長期間の投与期間を設定しているため、解剖後の評価に至っていない。

Strategy for Future Research Activity

平成31年度に以下の①②③、平成32年度に②③④の評価を行う。
①GTG投与による過食を誘発したC57BL/6マウスを高脂肪高蔗糖食にて飼育することによりNASHモデルマウスの作成を引き続き行う。②短鎖脂肪酸によってNASHの発症が抑制されるか評価する。GTG投与とHF/HSD飼育を開始する6週齢より短鎖脂肪酸（酢酸塩または酪酸塩）の経口投与を開始し、24週間後に解剖を行い、体重・摂餌量、耐糖能、血清AST、ALT、T-CHO、TG、HDL-C、LDL-Cの測定、内臓脂肪重量、肝重量、肝臓における炎症マーカー（TNFα、MCP1など）や線維化マーカー（TGFb1、Col1a1、αSMAなど）、肝臓の形態学的な評価、星細胞の老化の評価、肝腫瘍発生の評価を行う。③すでに形成されたNASHの進展や、肝腫瘍発生が短鎖脂肪酸投与にて抑制されるか評価する。短鎖脂肪酸の経口投与を14週齢または30週齢から開始し、4ヶ月から1年後まで長期間飼育し検討する。評価項目は②と同様とする。④短鎖脂肪酸によるNASHへの進展抑制効果がGPR43依存性であるか評価する。GPR43ノックアウトマウスにNASHモデル動物と同様にGTG投与とHF/HSD飼育を行い、短鎖脂肪酸によるNASH進展抑制効果が消失することを確認する。評価項目は②と同様である。

Causes of Carryover

次年度使用額が発生したが、少額であり使用計画に大きな変更はない。