• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2021 Fiscal Year Research-status Report

Generation of SIN3A mutant knock-in mice using GONAD method and searching of target molecule of breast cancer

Research Project

Project/Area Number 18K16255
Research InstitutionYamaguchi University

Principal Investigator

渡邉 健司  山口大学, 大学研究推進機構, 助教 (50711264)

Project Period (FY) 2018-04-01 – 2023-03-31
Keywords乳がん / GONAD法 / 変異解析
Outline of Annual Research Achievements

ERα 陽性乳がんの治療の一つとして内分泌療法が行われるが、多くの場合耐性が認められる。耐性を打破するためには、恒常的な ERα 高発現を抑制する効果的な治療法の開発が必要である。一方、乳がんはゲノム異常の蓄積が病態に関与する。我々は、ERα 発現を増加させる遺伝子変異の同定を試みた。我々は、ERα 発現を増加させるSwitch-Independent 3 Transcription Regulator Family Member A (SIN3A)遺伝子に変異を検出した。ERα 発現に対する機能を検討した結果、(i) 変異体は ERα の発現を上昇させるLoss-of-function 変異であること、(ii) 変異体は、乳がん細胞株の増殖を促進することを見出すことができた。現在、SIN3A変異体の機能をさらに詳細に検討するために、Genome-editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery (GONAD)法を用いてSIN3A変異体を乳腺特異的に発現するノックインマウスの作成を試みている。変異体を発現するマウスを作成するための予備検討を実施した。まず操作手技を確立するため、1本鎖DNAを用いずにGONAD 法を行うことでAKR1B7 のKO マウスを作成した。GONAD 法を用いて処置したマウスから52匹の胎児が生まれた。生まれた胎児の内、7匹(13.5%)が、両アレルのAKR1B7がノックアウトされていた。20匹(23.1%)は、AKR1B7の片方のアレルのみノックアウトされていた。13匹(25%)は、複数の箇所がノックアウトされたモザイク状態であった。このように一回のGONAD法によるマウスへの処置で短期間に両アレルノックアウトマウスを作成することができた。現在、SIN3変異導入マウスを作成するために、1本鎖オリゴDNAのエレクトロポレーションを用いた導入の条件検討を行っている。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

本研究では、SIN3A変異乳がんの分子機構を解明し、治療標的を同定するために、以下の3点について明らかにすることを考えている。①GONAD法により、乳腺特異的変異SIN3A発現マウスを作成する。②作成したマウスまたは、SIN3A変異導入ヒト乳がん細胞株を用いてSIN3A機能低下乳がんにおける標的遺伝子の同定を行う。③作成したマウスにおいて腫瘍の発生を確認できた場合、同定した標的分子に対する治療薬の効果を検討する。現在①、②を進行中である。当初の計画では、最終的に比較的長いプロモーター配列を含む目的遺伝子配列を一回で導入する予定であったが、導入効率が悪く実現できなかった。現在、目的遺伝子配列を分割し、導入できるのか確認中である。

Strategy for Future Research Activity

我々は、ERα 発現を増加させるSIN3A遺伝子変異乳がんの分子機構を解明するために、SIN3A変異体を発現するノックインマウスの作成を試みている。これまでの検討により、ノックイン用の1本鎖DNAを用いずに GONAD 法を行ったところ、両アレルが狙い通りに改変されたマウスの作成に成功し、GONAD法の手技に問題がないことを示した。現在、まず短い1本鎖のオリゴDNAを用いてノックインマウスの作成を試み、ノックインマウスも作成できるか確認を行っている。導入効率が依然として悪く苦戦しているが、オリゴDNAの導入濃度、導入時に使用するエレクトロポレーションの電圧の条件を細かく検討していきたいと考えている。

Causes of Carryover

次年度は、前年度購入した物品を使用し、実験を行う。

  • Research Products

    (10 results)

All 2022 2021

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results,  Open Access: 1 results) Presentation (6 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results)

  • [Journal Article] An elemental diet protects mouse salivary glands from 5-fluorouracil-induced atrophy2022

    • Author(s)
      Harada Koji、Ferdous Tarannum、Fujiwara Rieko、Watanabe Kenji、Mizukami Yoichi、Mishima Katsuaki
    • Journal Title

      Oncology Letters

      Volume: 23 Pages: 178-178

    • DOI

      10.3892/ol.2022.13298

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Liver-specific dysregulation of clock-controlled output signal impairs energy metabolism in liver and muscle2021

    • Author(s)
      Matsumura Takuro、Ohta Yasuharu、Taguchi Akihiko、Hiroshige Syunsuke、Kajimura Yasuko、Fukuda Naofumi、Yamamoto Kaoru、Nakabayashi Hiroko、Fujimoto Ruriko、Yanai Akie、Shinoda Koh、Watanabe Kenji、Mizukami Yoichi、Kanki Keita、Shiota Goshi、Tanizawa Yukio
    • Journal Title

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      Volume: 534 Pages: 415~421

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2020.11.066

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] GRP78 Antibodies Are Associated With Blood-Brain Barrier Breakdown in Anti-Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein Antibody-Associated Disorder2021

    • Author(s)
      Shimizu Fumitaka、Ogawa Ryo、Mizukami Yoichi、Watanabe Kenji、Hara Kanako、Kadono Chihiro、Takahashi Toshiyuki、Misu Tatsuro、Takeshita Yukio、Sano Yasuteru、Fujisawa Miwako、Maeda Toshihiko、Nakashima Ichiro、Fujihara Kazuo、Kanda Takashi
    • Journal Title

      Neurology - Neuroimmunology Neuroinflammation

      Volume: 9 Pages: e1038~e1038

    • DOI

      10.1212/NXI.0000000000001038

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Hydrogen sulfide suppresses the proliferation of intestinal epithelial cells through cell cycle arrest2021

    • Author(s)
      Xu Wenxi、Watanabe Kenji、Mizukami Yoichi、Yamamoto Yoshinari、Suzuki Takuya
    • Journal Title

      Archives of Biochemistry and Biophysics

      Volume: 712 Pages: 109044~109044

    • DOI

      10.1016/j.abb.2021.109044

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] 乳癌組織で検出された転写抑制因子SIN3A変異体は核外移行しエストロゲン受容体を増加させ増殖を促進する2021

    • Author(s)
      渡邉 健司、山本 滋、前田 訓子、西村 愛代、諌山 慧士朗、岡 正朗、永野浩昭、水上 洋一
    • Organizer
      第44回分子生物学会
  • [Presentation] 犬のリンパ球における5-アミノレブリン酸のIL-17産生増強作用2021

    • Author(s)
      伊賀瀬 雅也, 岩谷 直, 酒井 和紀, 渡邉 健司, 水上 洋一, 水野 拓也
    • Organizer
      第164回日本獣医学会
  • [Presentation] Transcriptome analysis in the pulp of ‘Saijo’ persimmon during storage at low temperature2021

    • Author(s)
      A. Nakatsuka, T. Esumi, Y. Mizukami, K. Watanabe and H. Itamura
    • Organizer
      7th International Symposium on Persimmon
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 高濃度トレハロースを用いた自家細胞由来3次元皮膚シート作製法開発2021

    • Author(s)
      武藤 潤、福田信治、渡邉健司、水上洋一、佐山浩二
    • Organizer
      第5回エラスチン/関連分子研究会
  • [Presentation] 加齢に伴って変化する子宮遺伝子群のトランスクリプトーム解析2021

    • Author(s)
      諌山 慧士朗, 渡邉 健司, 坂口 修一, 村田 智昭, 水上 洋一
    • Organizer
      第44回分子生物学会
  • [Presentation] ロボット分注装置を用いた新型コロナウイルスPCR検査の迅速解析方法の開発2021

    • Author(s)
      水上 洋一, 畑中千春, 中川真喜子, 西村愛美, 渡邉 健司
    • Organizer
      第32回日本医学看護学教育学会学術学会

URL: 

Published: 2022-12-28  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi