2019 Fiscal Year Research-status Report
緑膿菌感染症の自然免疫における抗体価の経時的解析と最適な獲得免疫の判定基準の検討
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18K16521
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
木下 真央 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (20816384)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 抗体価推移 / V抗原 / Ⅲ型分泌毒素 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
多剤耐性緑膿菌（MDRP）といった薬剤耐性グラム陰性桿菌による医療関連感染症が広がり、抗生剤に頼らない治療が社会的に求められている。我々はこれまでに、緑膿菌感染症に対する抗体療法・ワクチン療法について取り組んできた。研究成果より臨床で唯一使用することのできる免疫グロブリン製剤の受動免疫効果や経鼻ワクチンによる能動免疫療法の抗緑膿菌作用を見出した。本研究では、これらの成果をふまえて、緑膿菌に感染した時の生体の防御免疫機構について着目し、自然免疫における抗緑膿菌抗体価の経時的解析を行い、抗体価や生存に影響を与える因子を検討する。さらに多剤耐性緑膿菌株や免疫抑制状態の動物モデルを用いて獲得免疫のメカニズムの解明にむけた基礎研究を行ない、今後の臨床応用へと発展させたい。
令和2年までに①遺伝子組み換え緑膿菌V抗原タンパクの作成②緑膿菌性肺炎モデルによるPcrV抗体価の経時的解析を進めた。その結果、新たに緑膿菌性肺炎モデルにおいてPcrVとExoUに対する血清中のIgG・IgAは8週間を通じて抗体価の上昇は認めなかったが、緑膿菌投与群においてPcrVとExoUに対する血清中のIgMは4週まで上昇し、5週後から低下することが明らかとなった。緑膿菌感染症は初回感染におけるPcrV・ExoUに対する血清IgMの反応は認めたが、獲得免疫に必要な血清IgGの上昇を認めなかった。今後は自然免疫における抗緑膿菌抗体価の経時的解析が呼吸器感染病態のメカニズムの解明につながり、さらには新規治療戦略になる可能性について究明したい。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
①遺伝子組み換え緑膿菌V抗原タンパクの作成②緑膿菌性肺炎モデルによるPcrV抗体価の経時的解析に加えて③緑膿菌性肺炎モデルの生存率・体温変化・肺浮腫の程度・気管支肺胞洗浄中の抗体価の解析に関するプロジェクトが概ね順調に進展している。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は緑膿菌性肺炎モデルの生存率・体温変化・肺浮腫の程度・気管支肺胞洗浄中の抗体価の解析に加えて緑膿菌に感染した時の生体の防御免疫機構についてさらに抗緑膿菌抗体価（OprF, EndotoxinA, mTox）の経時的解析も行う予定である。また免疫ブロット法による抗体価に関連する新たな抗原の探索として亜致死量の緑膿菌感染で生存したマウスで生存したマウスから採血した血液と緑膿菌表面抗原を用いて免疫ブロットを行う。緑膿菌PA103株・多剤耐性緑膿菌株をTSB培地を用いて培養する。その後遠心し、沈殿物をsucrose含有バッファーによって溶解する。再度遠心し、上清を破棄したのち、ペレットをsucrose非含有バッファーにより溶解し、遠心後上清を回収する。表面抗原の抽出液をSDS-PAGEに注入する。その後ゲルを取り出しメンブレンに転写する。次に一次抗体として生存したマウスの血液を、二次抗体(Anti-Mouse IgG-Peroxidase antibody produced in rabbit)の反応後、最後にDAB(3,3’-diaminobenzidine)で発色し反応を確認する。
これら2つの過程を通して獲得免疫のメカニズムの解明と緑膿菌感染症に対する新規ワクチン抗原の発見のため基礎研究を継続し、今後の臨床応用へと発展させたい。
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| Causes of Carryover |
概ね順調に進んでおり、抗体価推移・動物実験がが順調に進んだために、当該年度の予算より少ない経費で実施可能であった。来年度以後に経費を振り分け、新たな知見を深めたい。また新たな抗原タンパクの作成や実験器具を購入するため上記費用が発生している。
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[Journal Article] Secondary in-hospital epidemiological investigation after an outbreak of Pseudomonas aeruginosa ST357.2020
Author(s)
Mihara T, Kimura T, Momiyama K, Kainuma A, Akiyama K, Ohara J, Inoue K, Kinoshita M, Shimizu M, Moriyama K, Fujita N, Sawa T.
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Journal Title
J Infect Chemother.
Volume: 26
Pages: 257-265
DOI
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