腸間膜リンパ液miRNAを介した出血性ショック後肺障害の分子生物学的研究

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K16523
• Research Institution: Nippon Medical School
• Principal Investigator: 倉橋 和嘉子 日本医科大学, 大学院医学研究科, 研究生 (80792944)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 出血性ショック / miRNA / 肺障害 / 腸間膜リンパ液

Outline of Annual Research Achievements

出血性ショック後亜急性期に発生する肺障害のコントロールは喫緊の課題であり、そのためには機序解明が必要である。これまでの研究で出血性ショック蘇生後の腸管虚血・再灌流により分泌される腸間膜リンパ液が肺障害を引き起こすことがわかっているが、リンパ液中の何が原因となっているのか未だ明らかでない。リンパ液中の様々な炎症性メディエーターが関与していることが示されているが、遠隔に存在する臓器まで生理活性を保ったまま働くのかと疑問を感じていた。
miRNAは22塩基程度の蛋白に翻訳されないnoncoding RNAであり、mRNAの翻訳の阻害と切断という2つのプロセスで標的になる複数の遺伝子を制御している。miRNAはRNA分解酵素の存在ため単体では体液中に存在できないが、miRNAキャリアを介して遠隔臓器の細胞まで移動でき、そのレシピエントの細胞内でも機能を発揮することができ、様々な疾患との関連が報告されている。
そこで本研究は「その原因にmiRNAが関係しているのではないか」と仮説を立て、「虚血腸管からリンパ液中に産生されるmiRNAが肺障害発生に関与しているか」を明らかにすることを目的とした。
リンパ液中のmiRNAの存在が明らかでなかったので、まず正常ラットのリンパ液中のmiRNAの同定を行い、血漿miRNAとの発現パターンとの差異を明らかにした。2018年度は、出血性ショックモデルの作製、ショック前後の腸間膜リンパ液の採取、そのリンパ液中のmiRNAの検出を行った。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

PCRに必要な条件下での出血性ショックモデルの作製に少々手間取り、またその後検出できたmiRNAの解析にやや難渋している。

Strategy for Future Research Activity

検出されたmiRNAをバイオインフォマティクス的に解析し、同定されたmiRNAが肺障害の発生を引き起こすのかin vivoで観察し、更にその機序解明のため、肺標的細胞への取り込みと局所での発現の確認をin vitroで検証する。

Causes of Carryover

出血性ショックラットの腸間膜リンパ液から検出されたmiRNAの解析にやや苦渋しており、次に計画したmRNAの同定まで進んでおらず、試薬を購入していないため初年度使用額が予定より少ないが、2019年に計画通り同実験を予定しており、試薬、物品に支出する予定である。