2020 Fiscal Year Research-status Report
血管芽腫検体とVHL病特異的IPS細胞を用いた新規腫瘍血管新生抑制療法の創出
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18K16552
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
高柳 俊作 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (90406489)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 血管芽腫 / VHL病 / iPS細胞 / 血管新生抑制 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
有望ながん治療の標的と考えられている腫瘍血管新生に対していまだ生存期間延長できる阻害剤はない。そこで、新規の血管新生抑制療法の創出が望まれているが、研究代表者(高柳)は、腫瘍血管新生が旺盛な脳腫瘍である血管芽腫（VHL病で好発する腫瘍でもある）の統合的ゲノム解析を長年行ってきた。その過程で、VHL遺伝子異常が、血管芽腫の腫瘍化において、重要であることを示してきた。本研究では、まず、血管芽腫検体に対して更なる網羅的ゲノム解析を追加して、VHL遺伝子以外の新規原因遺伝子の探索などを行っていく予定であった。特に，多数例の血管芽腫症例の網羅的メチル化データを取得して，解析を行ってきた．しかし，現状としては，有意な新規原因遺伝子候補はいまだ同定されていない．また、コピー数解析も行ったが、VHL遺伝子がある3番染色体のLOH以外に、新規のコピー数異常を認めなかった。さらに、本研究では、新たに樹立したVHL 病特異的 iPS 細胞の利用した解析を行っている。このiPS細胞などを用いて、新規原因遺伝子候補の機能解析を行う事で、腫瘍血管新生の更なる機序解明を行う方針であったが，こちらも，特異的iPS細胞を安定的に培養するのが，まだ困難な状態であり，さらなる細胞の機能解析が必要と思われた．
今後は，当院での血管芽腫の検体が集積してきたので，網羅的解析をさらに追加することや，iPS細胞の安定的培養条件の樹立をすることで，最終的には、新規の腫瘍血管新生抑制療法の構築を行う予定である．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
本研究では、東京大学脳神経外科にて摘出術を施行したHBの手術腫瘍検体（全32例）のDNAを用い、VHL遺伝子異常の解析、及びコピー数解析のためのSNParray、Infinium450Kを用いた網羅的メチル化解析を行ってきた。その後、解析済のHB検体に対して、さらに、次世代シークエンサーによる Target sequence、RNAsequence による網羅的ゲノム解析を追加した。さらに，多数例の血管芽腫症例の網羅的メチル化データを取得して，解析を行ってきた．しかし，現状としては，有意な新規原因遺伝子候補がいまだ同定されていない．
また、当科VHL病症例の血液、皮膚などにより、京都大学iPS細胞研究所などにて、VHL病特異的iPS細胞が樹立し、京都大学の研究協力者の協力により、樹立したiPS細胞のVHL 遺伝子を完全に不活化することで、血管芽腫瘍様の腫瘍ができることが確認できた。し
かし，こちらも，特異的iPS細胞を安定的に培養するのが，まだ困難な状態であり，さらなる細胞の機能解析が必要と思われた．昨年2020年は、コロナ禍の影響で大学での研究を施行する事に制限がかかり、研究全体としては遅れている状況である。
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| Strategy for Future Research Activity |
上記のごとく、研究全体は、コロナ禍の影響も受けて、進捗状況としては遅れている。しかし、最近は、それほど制限なく研究が進められるようになってきている。研究当初よりも，HB検体が集積されたので，今後も、その集積したHB検体に対して、次世代シークエンサーによる Target sequence、RNA sequence による網羅的ゲノム解析を追加し、いままでの遺伝子解析データを統合することで、VHL遺伝子以外の新規原因遺伝子候補の探索を行っていく。さらに、新たに作成した、VHL遺伝子を完全不活化したiPS細胞に対して，安定的な培養条件の樹立を行えるように，機能解析の追加を行う。この事で、腫瘍血管新生の更なる機序解明を行っていき、最終的には、新規の腫瘍血管新生抑制療法の構築を行っていく。
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| Causes of Carryover |
本年度は、次世代シークエンサの解析を行う予定で、そのために、解析料がかかる予定であったが、コロナ禍による研究制限のために、滞っていた状況である。
次年度以降に、安定的な細胞培養条件の樹立を行い、次世代シークエンサの解析を行っていく予定である。
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