2018 Fiscal Year Research-status Report
PD-1遺伝子破壊EGFRvIII特異的CAR-T細胞による膠芽腫治療法の開発
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18K16567
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
中澤 務 奈良県立医科大学, 医学部, 研究員 (00772500)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | CAR / PD-1 / CRISPR/Cas9 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、ヒト末梢血T細胞のprogrammed death-1(PD-1)遺伝子をclustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9(CRISPR/Cas9)を用いたゲノム編集技術により破壊し、かつ、レンチウイルスによる遺伝子導入技術を用いて膠芽腫に発現するがん変異抗原epidermal growth factor receptor, transcript variant III(EGFRvIII)特異的chimeric antigen receptor (CAR)を発現させ、PD-1を破壊したEGFRvIII特異的なCAR-T細胞(PD-1-KO-EvCAR-T)を誘導することを目標としている。誘導したPD-1-KO-EvCAR-Tについては、EvCAR、PD-1ならびにその他の細胞表面レセプターの発現、PD-1遺伝子の破壊効率、PD-1遺伝子破壊領域のDNA配列、in vitroにおける膠芽腫細胞に対する抗がん効果を評価する予定である。
平成30年度は、Cas9を搭載したsingle-guide RNA(sgRNA)発現ベクターにPD-1遺伝子に対するCRISPR配列を設計・構築した。培養細胞系（HEK293T細胞）に構築した遺伝子ベクターを導入しPD-1の標的遺伝子領域を破壊できたことをPCR法とresolvase反応で確認した。
平成31年度(令和1年度)は、PD-1-KO-EvCAR-Tの誘導とその特性解析（EvCAR、PD-1、その他の細胞表面レセプターの発現、膠芽腫細胞に対する増殖抑制試験）を行う予定である。誘導したPD-1-KO-CAR-TについてPD-1遺伝子の破壊領域のDNA配列解析も実施する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Cas9を搭載したsingle-guide RNA(sgRNA)発現ベクターにPD-1遺伝子に対するCRISPR配列を設計・構築した。
HEK293T細胞に構築した遺伝子ベクターを導入し、PD-1の標的遺伝子領域が破壊できたことをPCR法ならびにresolvase反応を用いて確認した。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の計画通りに、PD-1遺伝子破壊EGFRvIII特異的CAR-T細胞の誘導とその特性解析を実施する予定である。
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| Causes of Carryover |
平成30年度の研究進行状況から60,074円の次年度使用額が残った。平成31年度(令和1年度)に必要な物品の購入に使用する予定である。
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[Journal Article] Ex vivo-expanded highly purified natural killer cells in combination with temozolomide induce antitumor effects in human glioblastoma cells in vitro.2019
Author(s)
Tanaka Y, Nakazawa T(corresponding author), Nakamura M, Nishimura F, Matsuda R, Omoto K, Shida Y, Murakami T, Nakagawa I, Motoyama Y, Morita H, Tsujimura T, Nakase H.
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Journal Title
PLOS ONE
Volume: 14
Pages: e0212455
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Expression of peptide transporter 1 has a positive correlation in protoporphyrin IX accumulation induced by 5-aminolevulinic acid with photodynamic detection of non-small cell lung cancer and metastatic brain tumor specimens originating from non-small cell lung cancer.2019
Author(s)
Omoto K, Matsuda R, Nakai Y, Tatsumi Y, Nakazawa T, Tanaka Y, Shida Y, Murakami T, Nishimura F, Nakagawa I, Motoyama Y, Nakamura M, Fujimoto K, Hiroyuki N.
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Journal Title
Photodiagnosis Photodyn Ther
Volume: 25
Pages: 309-316
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Novel Human NK Cell Line Carrying CAR Targeting EGFRvIII Induces Antitumor Effects in Glioblastoma Cells.2018
Author(s)
Murakami T, Nakazawa T(equally contribution), Natsume A, Nishimura F, Nakamura M, Matsuda R, Omoto K, Tanaka Y, Shida Y, Park YS, Motoyama Y, Nakagawa I, Yamada S, Tamura K, Takeshima Y, Takamura Y,
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Journal Title
Anticancer Res
Volume: 38
Pages: 5049-5056
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Risk of brain herniation after craniotomy with lumbar spinal drainage: a propensity score analysis.2018
Author(s)
Motoyama Y, Nakajima T, Takamura Y, Nakazawa T, Wajima D, Takeshima Y, Matsuda R, Tamura K, Yamada S, Yokota H, Nakagawa I, Nishimura F, Park YS, Nakamura M, Nakase H.
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Journal Title
J Neurosurg
Volume: 8
Pages: 1-11
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Establishment of an efficient ex-vivo expansion method for highly purified human natural killer cells and evaluation of their antitumor activity on glioblastoma.2019
Author(s)
Nakazawa T, Tanaka Y, Shida Y, Nakamura M, Nishimura F, Matsuda R, Murakami T, Nakagawa I, Motoyama Y, Tsujimura T, Nakase H.
Organizer
Keystone Symposia: Innate and Non-Classical Immune Cells in Cancer Immunotherapy
Int'l Joint Research
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