進行性腎癌における至適逐次薬物療法マーカーとなるmicroRNAの同定

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K16736
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 岩本 秀人 鳥取大学, 医学部, 助教 (80621010)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: 腎細胞癌 / スニチニブ抵抗性 / microRNA / LAMP-2

Outline of Annual Research Achievements

我々は、これまでにヒト腎細胞癌株（ACHN、RCC23）を用いてスニチニブ耐性腎癌細胞株を作成し、続いて親株とスニチニブ耐性腎癌細胞株を用いたmicroarray により、2種のスニチニブ耐性腎癌細胞株で共通して上昇または低下しているmicroRNAを7種同定した。　その後、ACHNのスニチニブ耐性にmicroRNA194-5p及びそれと関連するタンパクであるLAMP-2（Lysosome associated membrane protein 2）が関与している可能性を見出したため、LAMP-2のスプライスバリアントであるLAMP-2A、2B、2Cのいずれがスニチニブ耐性に関わっているかについて研究を行った。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

先行研究として行った「腎細胞癌におけるスニチニブ抵抗性に関連するmicroRNAの検索」予定以上の時間を要したことが原因と考えられる。具体的には、スニチニブの継続曝露によってスニチニブ耐性を獲得した腎癌細胞株は、スニチニブに曝露されない期間があると自然に薬剤耐性が消失してしまうこと、またtotalのLAMP-2の発現が上昇している細胞株を作成することが技術的に困難であったことなどが挙げられる。また、新型コロナウイルスの感染拡大により、試薬の搬入や研究室の利用に制限が出たことも原因の一端と思われる。

Strategy for Future Research Activity

今後は、スニチニブ耐性腎細胞癌株における薬剤耐性解除の方法を模索する予定である。LAMP-2の発現上昇とそれに伴うmicroRNA194-5pの発現低下がスニチニブ耐性に関与することはin vitroの研究で示されたため、スニチニブ耐性腎細胞癌株にmicroRNA194-5pを添加して、スニチニブ耐性が解除されることがin vivoでも示されれば、今後の核酸医薬創薬の足がかりとなることが期待できる。
これまでの研究で、LAMP-2Aと2Bが耐性に関与していることが示され、またそれぞれの発現が上昇した細胞株も作成することができているため、今後はLAMP-2A、2Bをそれぞれ強制発現させた細胞株をヌードマウスの皮下に移植し、スニチニブ耐性腎細胞癌を持つモデルマウスを作成し、これを用いてスニチニブ耐性を検討するin vivoでの検証が可能である。
スニチニブ感受性マウスと耐性マウスにおいて、スニチニブを経口投与して腎細胞癌の縮小を確認し、耐性マウスにおける治療効果がmicroRNA194-5pの投与によって有意に改善することが示されれば、microRNA194-5pの創薬の可能性を広げることとなる。

Causes of Carryover

先行研究として行った「腎細胞癌におけるスニチニブ抵抗性に関連するmicroRNAの検索」予定以上の時間を要したことが原因と考えられる。具体的には、スニチニブの継続曝露によってスニチニブ耐性を獲得した腎癌細胞株は、スニチニブに曝露されない期間があると自然に薬剤耐性が消失してしまうこと、またtotalのLAMP-2の発現が上昇している細胞株を作成することが技術的に困難であったことなどが挙げられる。また、新型コロナウイルスの感染拡大により、試薬の搬入や研究室の利用に制限が出たことも原因の一端と思われる。
今後は、スニチニブ耐性腎細胞癌株における薬剤耐性解除の方法を模索する予定である。LAMP-2の発現上昇とそれに伴うmicroRNA194-5pの発現低下がスニチニブ耐性に関与することはin vitroの研究で示されたため、スニチニブ耐性腎細胞癌株にmicroRNA194-5pを添加して、スニチニブ耐性が解除されることがin vivoでも示されれば、今後の核酸医薬創薬の足がかりとなることが期待できる。

Research Products

• [Journal Article] Splice variants of lysosome-associated membrane proteins 2A and 2B are involved in sunitinib resistance in human renal cell carcinoma cells (2020)
  • Author(s): Ryoma Nishikawa, Osaki M, Sasaki R, Ishikawa M, Yumioka T, Yamaguchi N, Iwamoto H, Honda M, Kabuta T, Takenaka A, Okada F.
  • Journal Title: Oncol Rep. Volume: 44 Pages: 1810-1820
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research