Investigation about LAMP-2 which could be a noble therapeutic target against choriocarcinoma

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K16764
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 西野 公博 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (80801448)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: 絨毛癌 / 化学療法抵抗性 / 遠隔転移 / 細胞接着 / LAMP-2

Outline of Annual Research Achievements

１.絨毛癌細胞膜におけるLAMP-2の発現についての検討
絨毛癌細胞膜に普遍的にLAMP-2が発現していることを確認するため、絨毛癌細胞株(Jar、BeWo、JEG-3)を用いた局在確認実験、及び、実際の絨毛癌組織標本を用いた免疫組織化学を行った。抗LAMP-2抗体を用いたフローサイトメトリー実験により、すべての絨毛癌細胞株の細胞膜にLAMP-2が発現しているのが確認された。また、抗LAMP-2抗体を用いた細胞免疫染色実験により、LAMP-2が細胞膜に発現している事が確認された。さらに、抗LAMP-2抗体を用いた免疫組織化学により、LAMP-2が絨毛癌組織のみならず、正常絨毛、胞状奇胎、侵入胞状奇胎組織（さらにその中の合胞体性栄養膜細胞）に発現していることが確認された。
２.絨毛癌の接着、浸潤、転移機序における細胞膜LAMP-2の果たす役割の解明
細胞膜に発現しているLAMP-2の果たす役割を解明するため、絨毛癌細胞株Jarを用いた発現抑制モデル実験を行った。LAMP-2ノックアウト細胞株（細胞株はJar細胞を使用）をCRISPR/Cas9システムを用いて作成した。細胞増殖能はMTS assayにより、LAMP-2をノックアウトしても変化しないことが確認された。コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチンといた細胞外マトリックスへの接着能が、LAMP-2をノックアウトさせることにより、低下することが確認された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

上記に示したLAMP-2発現抑制モデル実験とともに、LAMP-2過剰発現モデル実験にも着手している。しかし、LAMP-2過剰発現ベクターの作成にかなりの時間を割いてしまい、本格的な実験に着手できていない。

Strategy for Future Research Activity

引き続き、LAMP-2発現抑制モデル実験を行うととともに、LAMP-2過剰発現ベクターの作成を続ける。しかし、LAMP-2過剰発現ベクターの作成が困難である場合、市販のベクターの購入を行う予定である。