2018 Fiscal Year Research-status Report
内耳細胞における小胞体ストレス下の脂質代謝酵素を解析し、感音難聴の原因を解明する
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18K16829
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| Research Institution | Yamagata University |
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Principal Investigator |
松井 祐興 山形大学, 医学部, 助教 (60594322)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 内耳障害 / リン脂質代謝酵素 / DGK / 外有毛細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
音響暴露モデルを作成し、内耳障害についてリン脂質代謝酵素であるDGKについての解析を行った。正常のモルモットに、音響暴露を行った。2週間が経過しても、聴力閾値は70dB程度の高度永続的難聴であると考えられた。音響暴露おけるコルチ器の障害程度を組織学的に評価した。音響暴露後2週間において有毛細胞マーカーであるMyosin7a陽性の内有毛細胞は一列に整列しているのに対し、暴露の負荷が強くなるにしたがって外有毛細胞の数が減少し、脱落が認められた。音響暴露後のDGKζ免疫反応の変化を解析した。音響暴露後24時間から72時間までは、外有毛細胞のDGKζ免疫反応は暴露前と変わらず核内に認められた。しかし音響暴露後1週間では、DGKζ免疫反応が核内から細胞質に移行している外有毛細胞と、反応自体が減弱している外有毛細胞が混在して観察された。さらに音響暴露後2週間では、DGKζ免疫反応の減弱している外有毛細胞が観察された。また、らせん神経節では、Parvalbumin陽性のらせん神経節細胞の核内にDGKζ陽性像が検出されたが、その周囲を支えるグリア細胞にはDGKζ免疫反応は認められなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
モルモットによる動物実験のため、条件設定に複数回の実験を要するため時間を要した。
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| Strategy for Future Research Activity |
野生型マウスおよび様々なアイソザイムのDGK-KOマウスから不死化したMEF細胞株において、DGKの過剰発現とsiRNA によるノックダウン実験を行い、小胞体ストレスを与えた後の小胞体ストレスタンパクの発現量と局在を検討する。
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| Causes of Carryover |
初期段階の条件設定が多かった。また、抗体を用いた実験が少なかった。次年度は様々な抗体を購入し、細胞や組織におけるウエスタンブロットや免疫染色を行う予定である。
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