2018 Fiscal Year Research-status Report
網脈絡膜組織に対する網膜色素上皮由来胎盤成長因子の保護効果
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18K16915
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
安藤 亮 北海道大学, 医学研究院, 客員研究員 (60399847)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 眼細胞生物学 / 胎盤成長因子 / 糖尿病網膜症 / 加齢黄斑変性 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
胎盤成長因子（placental growth factor, PlGF）は血管新生や血管形成に関与する血管内皮増殖因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)ファミリーの一員である。近年、VEGFファミリー分子の持つ組織保護作用について認識が深まりつつあるが、PlGFの生理的作用は未だ不明である。本研究の目的は、網膜の恒常性維持に重要な働きをする網膜色素上皮細胞(retinal pigment epithelium, RPE)、およびその周囲組織に対するPlGFの生理的役割を調べることである。
本年度の研究により、ヒトRPE細胞株hTERT-RPE1においてPlGF発現を抑制すると血清除去によるアポトーシスが亢進し、このPlGF抑制RPE細胞にPlGFを外的に添加すると、濃度依存的にアポトーシスが抑制されることが示された。また、PlGF抑制RPE細胞においてはVEGF受容体（VEGFR）-2蛋白が減少しており、同細胞にPlGFを添加すると、VEGFR-2蛋白が回復した。VEGFR-2のmRNA発現は変化しなかった。これらのことから、PlGFにVEGFR-2蛋白を安定化する作用があることが示された。親株RPE細胞では、血清除去時にVEGFを添加すると濃度依存的にアポトーシスが抑制されたが、VEGFR-2をsiRNAで抑制するとVEGFによるアポトーシスからの保護効果は失われた。同様に、VEGFR-2発現が減少しているPlGF抑制RPE細胞においても、VEGF添加によるアポトーシスの抑制は失われていた。これらの結果により、PlGFがVEGFR-2蛋白を安定化することでVEGFによるRPE細胞保護効果を支える機序の存在が示唆された。さらに、RPE細胞特異的PlGF欠損マウスを作成し、ジェノタイピングにより遺伝子型を確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
交付申請書に記載した平成30年度の研究実施計画のうち、「PlGF抑制RPE細胞を用いたin vitro実験によるアポトーシスの解析」および「RPE細胞特異的PlGF欠損マウスの作成」については終了し、検討により学術的意義のある結果を得ていることから、おおむね順調に研究は進展していると自己評価するものである。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和元年度は、PlGF抑制RPE細胞において、プロテアソーム阻害剤(MG132)、リソソーム阻害剤(バフィロマイシンA1)による分解系阻害がVEGFR-2発現に及ぼす影響の解析などをおこなう。またプロテアソームやリソソーム分解に関与する分子の発現や活性がPlGF抑制あるいは添加により変化するかをウエスタンブロッティングなどで解析し、PlGFによるVEGFR-2安定化の機序を検討する。さらに、RPE細胞特異的PlGF欠損マウスと同腹仔のPlGFヘテロおよびPlGF野生型コントロールマウスについて、網膜電図の測定および評価、光干渉断層計(OCT) による網膜および脈絡膜厚測定、HE染色による網脈絡膜組織の形態評価、網膜切片におけるTUNEL染色によるアポトーシス解析をおこない、比較検討することで網膜の形態学的および機能的評価をおこなう。
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| Causes of Carryover |
理由：平成３０年度の研究計画はPlGF抑制RPE細胞を用いたin vitro実験およびRPE細胞特異的PlGF欠損マウスの作成であったが、順調に研究が行われ、予定よりも低額の研究費で計画遂行が可能であったため。
使用計画：令和元年度に計画している、PlGFによるVEGFR-2安定化の機序の検討、およびRPE細胞特異的PlGF欠損マウス網膜の形態学的および機能的評価に使用する予定である。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] Clinical Features of Japanese Patients With Anti-α-enolase Antibody-Positive Autoimmune Retinopathy: Novel Subtype of Multiple Drusen2018
Author(s)
Ando R,Saito W,Kanda A,Kase S,Fujinami K,Sugahara M,Nakamura Y,Eguchi S,Mori S,Noda K,Shinoda K,Ishida S.
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Journal Title
American Journal of Ophthalmology
Volume: 196
Pages: 181～196
DOI
Peer Reviewed
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