2019 Fiscal Year Research-status Report
末梢血中を循環するfibrocyteの緑内障術後創傷治癒への関与の解明
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18K16929
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
小島 祥 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (80632661)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | Fibrocyte / 緑内障 / 濾過手術 / 創傷治癒 / MCP-1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、トラベクレクトミー後の創傷治癒過程におけるfibrocyteの関与を明確にし、線維化の過程での役割を明らかにすることである。平成30年度は まず、本研究の解析方法のひとつとなる2光子顕微鏡を用いた生体眼イメージングにより、炎症反応/炎症細胞の動きの可視化に取り組んだ。 我々の施設では、房水内のMCP-1濃度が高い症例でトラベクレクトミーの術後成績が不良であることを明らかにしており、その過程としてトラベクレクトミー後 の濾過胞周囲組織の創傷治癒にMCP-1が強く関与していることを臨床研究で示している。そこでまず、結膜及び結膜下組織において主に単球系細胞にeGFPが発現 するLysozoymeM(LysM)プロモーター下eGFP発現トランスジェニックマウスを使用した生体眼イメージングで、MCP-1負荷によりLysM-eGFP細胞の動きが活発になる ことを明らかにした(LysM-eGFP細胞速度 : 7.91±4.13μm/min)。次に抗炎症効果が期待されているリパスジルをMCP-1負荷前に眼表面に浸すことで、MCP-1単 独負荷で活性化された細胞の動きが有意に抑制されることを明らかにした(LysM-eGFP細胞速度 : 2.44±1.22μm/min, p<0.05)。この実験結果については第123 回日本眼科学会総会の一般講演にて発表した。平成31年度はFibrocyteの結膜下組織における創傷治癒過程への関与を検証するためにGFPで標識された抹消循環単核球を野生型マウスの抹消循環に入れ、結膜創部やMCP-1負荷部への遊走/浸潤などについて生体眼イメージングでの評価に取り組んだ。現在実験は進行中で、画像を取得している段階である。評価可能な画像が取得でき次第順次解析を行う予定であるが、現時点での研究成果のまとめを第30回緑内障学会のシンポジウムで発表した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本研究に必要なマウス末梢血中のfibrocyteを含むPBMCsのストックの一部がフリーザーの故障により使用困難となり、再び採取するとことから再開することとなったため、課題の進捗が予定よりも遅れてしまった。
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| Strategy for Future Research Activity |
マウス末梢血からfibrocyteを含むPBMCsの単離を行い、PBMCs中のfibrocyteの割合を、fibrocyteのマーカー(CD34, CD45, I型コラーゲン)に対する組織免疫染 色とフローサイトメトリー法で確認する。トラベクレクトミーを施行した野生型マウスにグリーンマウスから単離したPBMCsを静注し、組織免疫染色で遊走して きたGFP陽性PBMCsの数と局在、αSMAの発現を観察する。また結膜下にMCP-1を注入して同様の観察を行い、MCP-1のfibrocyteへの影響についても検証する。さらに2光子顕微鏡を用いた生体眼イメージングにより、結膜創部におけるfibrocyteの浸潤や挙動の観察し、結膜下組織の創傷治癒過程におけるfibrocyte関与を検証する。以上の方策で、トラベクレクトミー術後の創傷治癒過程にお ける末梢血液循環中のfibrocyteの関与を明らかにし、MCP-1の影響も含めた線維化の分子メカニズムの解明を最終目標とする。
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