2020 Fiscal Year Research-status Report
リソソームにおけるコレステロール代謝とHMGB1分泌を関連づける新機構
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18K17041
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Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
Principal Investigator |
大出 貴資 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 非常勤講師 (30804190)
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Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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Keywords | HMGB1 |
Outline of Annual Research Achievements |
歯周病の原因は主に細菌感染による炎症反応であるが、肥満や糖尿病といった代謝性疾 患と歯周病の関連が指摘されている。HMGB1は細菌感染や障害を受けた細胞から放出され る炎症メディエーターであり、細菌に曝露される歯肉上皮細胞からも放出される。HMGB1 放出にはオートファジーの分子装置が関与する。しかしこれまでに代謝性疾患とHMGB1放 出との関連は明らかになっていない。コレステロール輸送阻害剤によってコレステロール がリソソームへ蓄積し、阻害剤の刺激によって、細胞外にhigh mobility group box-1 protein (HMGB1)が分泌されていることがHMGB1 抗体を用いた ELISA キットによって確認された。そこで、そのHMGB1分泌にはMammalian/mechanistic target of rapamycin (mTOR)C1 がリソソーム膜上で不活性化する機構が関与していると考え、コレステロール輸送阻害剤による mTORC1 活性・mTOR 細胞内局在への影響を調べた。 マクロファージ(RAW264細胞)を、細胞培養したのちに、コレステロール 輸送阻害剤にて刺激を行い、イムノブロットによる下流に存在する S6 kinase beta (S6K) のリン酸化および抗 LC3 抗体を用いた免疫蛍光細胞染色によるオートファゴソームの形成により評価した。コレステロール輸送阻害剤としてイトラコナゾール並びにU18666Aを、ポジティブコントロールとしてラパマイシンを用いた。 しかしながら、ウェスタンブロッティング法の結果から、コレステロール輸送阻害剤によるmTORC1活性の著明な変化を確認することができなかった。つまり、mTORC1 の不活性化を認めることができなかった。顕微鏡観察でも明らかな所見を認めなかった。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
新型コロナウイルスの影響による実験計画の遅れと、期待していた実験結果が得られていないため。
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Strategy for Future Research Activity |
コレステロール輸送阻害剤が mTORC1 活性に影響しなかった場合は、マウス前骨芽 細胞 MC3T3-E1 で mTOR への効果を報告しているセラミドアナログ D-PDMP (Ode et al., Exp. Cell Res. 2017) の効果を調べる。効果があれば、D-PDMP の効果の普遍性が示 唆される。効果が無かった場合には MC3T3-E1 細胞と比較して mTOR のリソソームから 小胞体への移行メカニズム解明の手がかりとなる。
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Causes of Carryover |
新型コロナウイルスの影響による実験計画の遅れ。予定している実験を今年度に継続する。
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