2019 Fiscal Year Research-status Report
VEGF-Cによるリンパ管新生効果は,骨再生・修復促進に関与しうるか?
Project/Area Number |
18K17173
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Research Institution | Kagoshima University |
Principal Investigator |
柚木 寿理 鹿児島大学, 医歯学域鹿児島大学病院, 助教 (80815621)
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Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2023-03-31
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Keywords | リンパ管 / VEGF-C / 骨再生 / リンパ管新生 |
Outline of Annual Research Achievements |
本研究は骨再生過程におけるリンパ管の役割の解明と,リンパ管新生誘導による骨再生効果に与える影響を解明し,顎骨欠損に対する新たな治療戦略に必要な治験を得ることを目的とし実験を行っている. 本研究を遂行するため,C57BL6/Jマウス頭蓋骨に骨欠損領域を形成し,リンパ管新生因子であるVEGF-C添加/非添加のscaffoldを移植することによって欠損修復を施し,その後の骨再生とリンパ管新生との関連性について分析を進めている. まず,事前の検討により,MSCと骨補填材を混和した移植体をマウス頭頂骨部に移植することにより,骨増生部位には血管のみならずリンパ管も形成されていることを明らかにした.そこで,骨再生過程におけるリンパ管の役割を解明するために,8週齢のC57BL6/Jマウスの頭蓋骨へトレフィンバーにて直径4mm(クリティカルディフェクト)の骨欠損モデルを作製し,VEGF-Cをゼラチンハイドロゲルに含有させ欠損部に移植した. ①sham群,②欠損のみ群,③欠損+PBS含有ゼラチン群,④欠損+VEGF-C含有ゼラチン群の各種対照群を準備し,移植後6週目と8週目にマウスを屠殺して骨形成能およびリンパ管新生能について評価を行った.評価はμCTによる骨再生量の定量,組織学的評価(HE染色),リンパ管形成についてはLYVE-1抗体を用いた免疫組織学的観察を行った.しかし,この動物実験モデルの条件では明らかな骨再生能はみとめられなかったため,まずはBMP等を用いて欠損部に確実に骨再生を促し,免疫組織学的観察にてリンパ管を評価することとした.
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
安定した動物実験モデルの確立に時間を費やした.VEGF-Cにリンパ管新生能だけではなく,骨再生能があることは以前vitroにて証明したが,現段階でvivoにてVEGF-Cを使用し骨再生を試みるもそれが叶わない状況である.そこでVEGF-Cの評価に先立ち,まずは実験モデルを確立する必要があるので,確実に骨再生を促すためBMP9を用い,scaffoldの種類をいくつか検討した.
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Strategy for Future Research Activity |
数回実験を繰り返し,今回BMP9とゼラチンゲルを用いて,8週齢のC57BL/6マウスの頭蓋骨欠損に骨再生を促し,それをμCTと組織学的評価にて確認した.ようやくモデルが確立したので,今後,LYVE-1抗体等を用いた免疫染色にてリンパ管を染色し,一視野あたりの数や密度をコントロールと比較する. また,リンパ管新生阻害による骨再生の影響を比較するために,scaffoldにリンパ管新生阻害剤(VEGFR3阻害剤)を含有させ,同様にマウス頭蓋骨欠損モデルを作製し,μCT撮影,H-E染色による組織学的評価,免疫染色によって評価を行う
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Causes of Carryover |
現在中断中であり,令和4年4月1日研究再開予定である.再開後,計画していた実験のための物品購入費にあてる予定である.
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