2018 Fiscal Year Research-status Report
凍結切片を用いたiPS細胞の分化誘導法による品質評価法の確立
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18K17210
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Research Institution | Tsurumi University |
Principal Investigator |
田所 晋 鶴見大学, 歯学部, 非常勤講師 (70552412)
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Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2020-03-31
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Keywords | 再生医療 / iPS細胞 / 分化誘導 |
Outline of Annual Research Achievements |
iPS細胞の効率的かつ確実な分化誘導法の確立を目指し、実際に再生を目指す組織・臓器自体に分化誘導環境が整っているのではないかという仮説の下、目的臓器の凍結切片上でiPS細胞を培養し分化誘導した。 マウスから肝臓、脳、脊髄、心臓、膵臓、脾臓、腎臓、唾液腺を摘出し、それぞれカバーガラス上に凍結切片を作製する。これを同径のガラスボトムディッシュ内に静置し、その切片上に由来の異なる数種のiPS細胞を播種し、培養した。その結果、培養期間中にいくつかの切片上で経時的なiPS細胞の形態学的変化を観察した。また、肝臓、脳、脊髄の上で培養を行ったiPS細胞で、それぞれの細胞に特異的な分子のRNAの発現とタンパク質の発現を認めた。これは異なる体細胞由来のiPS細胞や異なる樹立方法のiPS細胞4株でも同様の結果が得られ、本法が普遍的に様々な由来のiPS細胞の分化誘導に応用できる可能性が強く示唆された。 さらに本法における、培養上清中の各種因子の解析や、細胞の接着する足場としての微小環境などの分化誘導環境、さらには凍結組織切片が放出するmicroRNAなどに着目することにより、分化誘導環境の詳細な解析を行い、その分化誘導現象のメカニズムを解明することで、本法のみでなく現在報告されている様々な分化誘導法をより効率的で確実な誘導法とする一助となることを目指すとともに、本法による分化誘導刺激に対する反応性の差に基づいたiPS細胞クローンの選別および品質評価の判断が正しいかどうかについて検討し、本法の実用化が可能かどうかについて検討する。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画では、凍結切片上培養における分化誘導メカニズムの解明として①各種組織の凍結切片上培養による分化誘導の検討②iPS細胞の誘導効率の差の検討③凍結切片上培養における分化誘導メカニズムの検討④分化誘導の高率化の検討の4つの観点から検討を予定していた。①②については予定していたすべての組織で検討はできていないが、凍結切片上培養による分化誘導が可能であることとその誘導効率の検討はできている。また、③についてはタンパク質因子とmicroRNAによる分化誘導への影響が評価できたため、おおむね順調に進展していると評価できる。
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Strategy for Future Research Activity |
これまでの結果を受け、予定している分化誘導メカニズムの検討と分化誘導の効率化の検討を行う。
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Causes of Carryover |
理由 薬価の変動や、予定額と差が生じた。 使用計画 次年度の物品費用にあてる。
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