2020 Fiscal Year Annual Research Report
Capability of relatively mature osteoblasts to shift bone forming osteoblasts
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18K17258
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
沖田 紗季 広島大学, 医系科学研究科(歯), 研究員 (20806674)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 骨芽細胞 / シングルセルRNA-Seq |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Lyn-Venus+骨芽細胞のシングルセルRNA-Seqを行い，解析細胞数を初回の３倍に拡大し，各種機械学習による再解析を行った。シーケンスデータを定量化し，発現変動の大きい上位遺伝子を抽出し，ヒートマップを作製した。得られた結果は初回の解析結果を概ね反映しており，データの信頼性が担保できた。Cd34+クラスターとその他のクラスター（代表的クラスターとして成熟骨芽細胞の遺伝子発現プロファイルが有意なクラスター：成熟骨芽細胞クラスター）のGO解析を行った。その結果から，Cd34+クラスターは予想通り未分化な形質を維持していることが示唆されたため，擬似時系列解析を行った。その結果，Cd34+クラスターを除くクラスターの細胞は骨芽細胞の分化系列に分布するのに対し，Cd34+クラスターの細胞はこれらの系列上に分布せず，異なる擬似時系列を形成した。このことから，Cd34+クラスターは未分化な細胞集団と異なる可能性が推測された。
新生仔Lyn-Venusマウス頭頂骨からFACSによりCD34+/Venus+細胞を回収し，この細胞を通常の骨分化誘導培地で培養したものの，細胞の生存率が悪く解析不能であった。ソーティングの影響を軽減し，CD34+/Venus+細胞を単離しても同細胞の生存率の改善は認められず，また増殖能力についても特筆すべき所見は得られず，ex vivoでの解析はペンディングとした。
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