2020 Fiscal Year Annual Research Report
Synthetic chemistry-genetic engineering technology enabling the modification of antibody protein functions
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18K19182
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
西形 孝司 山口大学, 大学院創成科学研究科, 教授 (90584227)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
星田 尚司 山口大学, 大学院創成科学研究科, 教授 (00314823)
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| Project Period (FY) |
2018-06-29 – 2021-03-31
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| Keywords | タンパク / アミノ化 / アルキル化 / 酵素 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
有機合成化学と遺伝子工学的アプローチの２通りから報告する。
有機合成化学：人工設計した抗体タンパク合成には，1)非天然アミノ酸の新規合成法開発と2)非天然アミノ酸のtRNAへ組み込む方法を開発する必要がある．非天然アミノ酸の合成法は、銅触媒または塩基条件下によるカルボン酸誘導体であるαブロモカルボニル化合物とのアミノ化カップリング法をこれまでに見出してきた．本年は、金属触媒非存在下での非天然アミノ酸合成プロセスの確認を昨年に引き続き行った。αブロモカルボニル化合物を炭酸セシウム存在下アルキルアミンとの反応を試みたところ、アセトニトリル中室温にて対応するアミノ化生成物を確認することができた。さらに，キラルαブロモカルボニル化合物をアニリンと同条件下で反応させたところ，基質の立体を保持した生成物を得ることができた．しかし，保持率は70%程度と中程度にとどまっており，さらなる反応条件の改善が必要である．また、アミンの代わりにアルコールをキラルαブロモカルボニル化合物と反応させたところ，アミノ化反応とは異なり最高で98%のキラル保持率で反応が進行した．得られた生成物はエーテル体であるがこの知見をアミノ化反応へと展開することで今後キラル非天然アミノ酸合成へと展開できると期待している．反応機構を明らかにし、合成した非天然アミノ酸のtRNAへの組み込みを目指す。
遺伝子工学：緑色蛍光タンパク質GFPに結合する新たなNanobodyを用いて，これまでと同様の手法で抗原認識に重要なアミノ酸配列を解析した。また，抗原側の結合部位が報告されている別のNanobodyおよびその抗原タンパク質を用いた解析を行った。それぞれの変異解析およびこれまでの変異解析から，結合を変化させる類似の変異が見つかった。非天然アミノ酸を導入する準備としてin vitro翻訳システムによるNanobody合成を試みた。
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Research Products
(1 results)
