2018 Fiscal Year Research-status Report
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18K19274
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| Research Institution | Osaka Prefecture University |
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Principal Investigator |
稲葉 俊夫 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 客員教授 (00137241)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
杉浦 喜久弥 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 教授 (30171143)
鳩谷 晋吾 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 准教授 (40453138)
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| Project Period (FY) |
2018-06-29 – 2021-03-31
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| Keywords | 再生医療 / 統合動物科学 / Muse細胞 / 幹細胞 / トランスレーショナルリサーチ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、2010年にヒト体内に存在する腫瘍化の危険性が極めて低い新規の多能性幹細胞としてMultilineage-differentiating stress enduring cell（Muse細胞）の発見をもとに、ヒトと共通の生活習慣病などが自然発症するイヌのモデルを使い、未だ報告の見当たらないイヌの脂肪からMuse細胞の分離・同定、および本細胞を用いた再生治療の有効性と安全性を確認することにより、獣医領域における新しい研究分野の再生医療を推し進めるとともに、ヒト再生医療の実現を早めることを目的としている。本研究年度では、イヌMuse細胞の分離と保存、およびイヌMuse細胞の細胞生物学的諸性質について検討し、以下の結果を得た。
１．既存の脂肪組織由来間葉系幹細胞（ADSC）培養キットを用いて作製したイヌADSCを、長時間トリプシンに暴露して極度のストレスを与えることにより、Muse細胞の特徴の一つとされている浮遊培養でES細胞やiPS細胞が形成する胚様体に酷似したクラスターを形成する細胞を得た。
２．フローサイトメーターを用いて本細胞クラスターの特性を解析した結果、多能性幹細胞のもつ特徴の一つであるアルカリホスファターゼ（ALP）活性が陽性、および未分化マーカーであるSSEA3およびNanogについて免疫染色法にて陽性であった。さらに、PCR装置を用いて多能性マーカーであるOct3/4、SOX2、NANOGにおける遺伝子発現量の比較を行った結果、これまでのADSCよりも高値を示した。
３．本細胞を用いて、三胚葉性への分化能の検証を行った。誘導培地を用いて分化誘導後の細胞は、脂肪・骨芽細胞（中胚葉）、肝細胞マーカーであるALBおよびalpha-FP（内胚葉）、神経肝細胞マーカーであるNestinおよび神経細胞マーカーであるMAP2（外胚葉）に陽性を示し、これらはヒトで報告されているMuse細胞の特徴を有していることが確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度に予定していた研究計画の①イヌMuse細胞の分離、および②イヌMuse細胞の細胞生物学的諸性質の解析を概ね達成できたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
本細胞を用いて今年度に引き続き次年度には、以下の３項目について研究を推進する。
１．イヌMuse細胞の最適な分離・培養条件を設定するために、①トリプシン処理時間等分離方法についての検討、②長期継代するための培地の検討、および③凍結保存方法の検討を行う。
２．末梢血単核球との共培養により、細胞からの各種サイトカイン分泌量をELISA法で測定することにより、イヌMuse細胞の免疫調節能を調べる。
３．獣医領域では幹細胞製品は医薬品と同じ扱いで、まだ製品として承認されたものはないことから、細胞製剤は院内にて調整する必要があるために、培養に不慣れな獣医師でも安全で平易に培養可能であり、また高品質な細胞培養ができるような簡易型イヌMuse細胞培養キットを作製する。
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