2019 Fiscal Year Annual Research Report
Re-engineering of AAV particle by "peptide insertion" method
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18K19298
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
高木 淳一 大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (90212000)
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| Project Period (FY) |
2018-06-29 – 2020-03-31
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| Keywords | アデノ随伴ウイルス / 環状ペプチド / ターゲッティング / 遺伝子治療 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（項目１）PAタグを利用した、AAVキャプシドへのペプチド挿入デザインの評価と最適化： この項目は平成３０年度に完了したので実施しなかった。
（項目２）ペプチド挿入型AAVベクターによる細胞感染の評価：発現カセットにGFPの代わりにルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだpAAV-lucを自作し、これをpRCプラスミドとともにもちいて改変型AAV粒子を調製した。HEK細胞に感染させ、ルシフェラーゼの活性を測定することで遺伝子導入能の定量系を構築した。また、GFPに代えてより明るく発現が安定なAcGFPを搭載したAAVも作製し、遺伝子導入量をFACSによって定量する系も構築した。
（項目３）AAV感染成立に必要な第2の相互作用部位の解明：前年度までにAAV2由来のVP3キャプシドタンパク質を抗原としたモノクローナル抗体を９クローン樹立し、その認識特異性をしらべた結果、残念ながらどの抗体もネイティブなAAV粒子に対する反応性が極めて低いことがわかった。しかしながら、PAタグ挿入型AAVの感染実験を通して、４カ所の挿入候補部位のうち、必須なのはS2だけであり、他の３カ所は受容体への結合に必須ではないことがわかった。
（項目４）PAタグ以外のターゲッティング用ヘアピンターンペプチドへの応用： AAVキャプシド上にヒトプレキシンB1結合性ペプチドmP6-9を挿入した変異ウイルスを構築し、プレキシンB1発現細胞への感染実験を行った結果、予想通りプレキシンB1の発現に完全に依存する遺伝子導入が起こることを確認した。これにより、本研究課題の最大目標である、「標的指向性の付与」が可能であることを実例をもって示すことができた。
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[Journal Article] Structural Basis of Sarco/Endoplasmic Reticulum Ca<sup>2+</sup>-ATPase 2b Regulation via Transmembrane Helix Interplay.2019
Author(s)
Inoue M, Sakuta N, Watanabe S, Zhang Y, Yoshikaie K, Tanaka Y, Ushioda R, Kato Y, Takagi J, Tsukazaki T, Nagata K, Inaba K
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Journal Title
Cell reports
Volume: 27(4)
Pages: 1221-1230
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Macrocyclic peptide-based inhibition and imaging of hepatocyte growth factor.2019
Author(s)
Sakai K, Passioura T, Sato H, Ito K, Furuhashi H, Umitsu M, Takagi J, Kato Y, Mukai H, Warashina S, Zouda M, Watanabe Y, Yano S, Shibata M, Suga H, Matsumoto K
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Journal Title
Nature chemical biology
Volume: 15(6)
Pages: 598-606
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Distinct Localization of Mature HGF from its Precursor Form in Developing and Repairing the Stomach.2019
Author(s)
Jangphattananont N, Sato H, Imamura R, Sakai K, Terakado Y, Murakami K, Barker N, Oshima H, Oshima M, Takagi J, Kato Y, Yano S, Matsumoto K
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Journal Title
International journal of molecular sciences
Volume: 20(12)
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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