2019 Fiscal Year Annual Research Report
Identification of genes involved in germline sex determination by global screening
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18K19332
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
西村 俊哉 名古屋大学, 理学研究科, 助教 (10758056)
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| Project Period (FY) |
2018-06-29 – 2020-03-31
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| Keywords | 生殖細胞 / CRISPR/Cas9 / メダカ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では生殖細胞の性に重要な遺伝子群を効率的に同定するために、CRISPR/Cas9による網羅的スクリーニング系の確立を目指す。そのために本年度は（１）候補遺伝子の絞り込み、（２）候補遺伝子の効率的な機能解析法 の２点について遂行した。
（１）については生殖細胞の性決定に重要な分化段階の生殖細胞を精巣及び卵巣からセルソーターにより分取し、RNAseq用ライブラリーの作製、次世代シーケンサーによるシーケンス反応まで行った。昨年度も同様の実験を行ったがライブラリーの質が悪かったため、細胞数を増やし再実験を行った。今後、発現差解析を行う予定である。
（２）については、昨年度に精子形成が進行するとEGFPあるいはmCherryを発現するshippo1b-EGFP/mCherryトランスジェニック（TG）メダカを作出した。卵形成が進行するとEGFPを発現するfigla-EGFPメダカはすでに作出していた。これらのTGメダカを用いることで、XYオスで卵形成が、XXメスで精子形成が進行したことを指標に候補遺伝子のスクリーニングを行う予定であった。しかしながらこれらのTGメダカだけでは、観察したメダカがXXかXYかが判別できなかった。本年度には、さらなる効率的なスクリーニングシステムを構築するために、XXとXYメダカをEGFPの蛍光の有無で識別可能なTGメダカが作出できないか検討した。そのためにY染色体上の性決定遺伝子DMY下流にhsp-EGFP-BGHpAをノックインしたTGメダカを作出した。その結果、XYメダカのみの眼をEGFPで光らすことに成功した。このTGメダカと上記の精子形成・卵形成の進行を蛍光でモニターできるTGメダカを交配させることで、XXとXYメダカを区別した上で、精子形成あるいは卵形成の進行を評価できるようになった。
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[Journal Article] Seasonal changes in NRF2 antioxidant pathway regulates winter depression-like behavior2020
Author(s)
Nakayama T, Okimura K, Shen J, Guh Y-J, Tamai K, Shimada A, Minou S, Okushi Y, Shimmura T, Furukawa Y, Kadofusa N, Sato A, Nishimura T, Tanaka M, Nakayama K, Shiina N, Yamamoto N, Loudon A.S, Nishiwaki-Ohkawa T, Shinomiya A, Nabeshima T, Nakane Y, and Yoshimura T
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Journal Title
PNAS
Volume: -
Pages: 1-10
DOI
Peer Reviewed
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