2019 Fiscal Year Annual Research Report
Isolation of nitrifiers not via highly-enriched culture using a selective medium
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18K19857
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| Research Institution | Chuo University |
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Principal Investigator |
諏訪 裕一 中央大学, 理工学部, 教授 (90154632)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤谷 拓嗣 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 産総研特別研究員 (50708617)
黒岩 恵 中央大学, 理工学部, 助教 (00761024)
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| Project Period (FY) |
2018-06-29 – 2020-03-31
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| Keywords | 硝化細菌 / 純粋培養 / 亜硝酸酸化細菌 / アンモニア酸化細菌 / アンモニア酸化アーキア / 限界希釈法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では，新たに設計した硝化菌に選択性の低い培地を用いて，既存株とは異なる性質を持つ硝化菌を分離することを試みた。
１）0.75mM尿素を含む培地に森林土壌を接種して培養した。NO3-が蓄積した培養から亜硝酸酸化細菌（NOB）の培養を獲得し，CN101株を単離した。16S rRNA遺伝子とnxrB遺伝子の塩基配列からNitrobacter sp.と同定した。予備実験の結果，CN101株のNO2-に対するKm値は，既知の土壌Nitrobacter属細菌のKm値に比べ1/20で，土壌で優占するNitrospira属細菌のKm値に匹敵するとみられた。現在，検証中である。これとアンモニア酸化微生物（AOM）が共存する培養を継代することに成功した。この培養からAOMを単離する予定である。
２）土壌抽出液と1.5 mM 15NH4+または0.75 mM 15N-尿素を含む培地を作成し，畑土壌中のAOMをMPN計数した。AOMのMPN計数値は合成無機培地によるMPN計数地を2 - 50倍上回った。硝化能のある培養の大半では，アンモニア酸化細菌（AOB）かアーキア（AOA）のいずれかが見出された。これらの培養で，４種の新規なAOAが集積されたことが推定された。既存株との相同性は94.7%～85.1%であった。有機物を含む土壌抽出培地ではheterotrophが卓越するが，AOA培養の16S rRNA遺伝子アンプリコン解析の結果， Nitrosopumilus属のAOAが2%まで集積される場合があり，限界希釈法でAOAが単離できる可能性が示唆された。
３）Oligotrophicな土壌AOBとして，４株の新規なNitrosospira属AOBを純化することができ，ゲノムデータを取得した。
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Research Products
(3 results)
