2008 Fiscal Year Annual Research Report
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19036001
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
若松 馨 Gunma University, 大学院・工学研究科, 教授 (40222426)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
飯塚 靖子 群馬大学, 大学院・工学研究科, 技術専門職員 (60375566)
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| Keywords | ソフトな相互作用 / 蛋白質 / NDSB / 凝集 / 熱変性 / NMR / 重水素化 / 合成 |
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| Research Abstract |
ヒトのガン関連遺伝子のようにソフトな相互作用をする蛋白質は創薬のターゲットとなっている. しかし, これらの蛋白質は単独では特定の立体構造を形成しない不定形配列を有するので, 凝集しやすく立体構造を解析しにくいという問題がある. 蛋白質の凝集を防止し結晶化に利用されてきたnon-detergent sulfobetaine(NDSB)のNMR測定への応用を我々は主に研究した. その成果を以下に列挙する.
1. NDSBは種々の蛋白質の熱変性温度を上昇させた(0.5Mで約4℃). これによりNMRの測定温度は10℃以上上げる事ができ, 質の高いスペクトルが得られるようになった.
2. 常温でのNMR測定における蛋白質の凝集はグルタミン酸とアルギニンの等モル添加により防止される事が示されているが, この添加物は高温での安定性は向上させなかった. また, グリセロールはシグナルをブロードにするので, 高温での測定にはNDSB類がベストであった.
3. 市販のNDSBは重水素化が困難なので, 重水素化が可能なNDSB-newとその重水素化物を合成した. NDSB-newは強い凝集防止能を示した. また, 重水素化NDSB-newの存在下でaFGFの構造をNMRで決定した. その構造はX線で決定した構造と有意な差がなかった.
4. NDSB-newは安価に大量に合成する事が可能であり, 蛋白質の精製過程でbufferに添加する事も可能である. 凝集しやすく濃縮中に沈殿してしまう2種類の蛋白質はNDSB-newの添加により濃縮でき, 濃度も収率も20倍以上に上げる事ができた.
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[Journal Article] Discovery of mitocryptide-1, a neutrophil-activating cryptide from healthy porcine heart2008
Author(s)
H. Mukai, Y. Hokari, T. Seki, T . Takao, M. Kubota, Y. Matsuo, H. Tsukagoshi, M. Kato, H. Kimura, Y. Shimonishi, Y. Kiso, Y . Nishi, K. Wakamatsu, E. Munekata,
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Journal Title
J. Biol. Chem. 283
Pages: 30596-30605
Peer Reviewed
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[Presentation] 高温での溶液NMR測定における蛋白質のNDSBによる安定化2008
Author(s)
若松馨, 石井毅, 向瓏, 細田和男, 神谷歩, 金子敬輔, 榎本舞弓, 井上裕介, 窪田健二, 行木信一, 河野俊之
Organizer
第81回日本生化学会大会
Place of Presentation
兵庫
Year and Date
2008-12-09
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[Presentation] Stabilization of proteins by NDSB for solution NMR measurements at. el evated temperatures2008
Author(s)
Kaori Wakamatsu, Takeshi Ishii, Long Xian, Kazuo Hosoda, Ayumi Kamiya, Mayu Enomoto, Shin-ichi Tate, Yusuke Inoue, Kenji Kubota, Nobukazu Nameki, Toshivuki Kohno
Organizer
第46回日本生物物理学会
Place of Presentation
福岡
Year and Date
2008-12-03
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[Presentation] 高温での溶液NMR測定における蛋白質のNDSBによる安定化2008
Author(s)
若松馨, 石井毅, 向瓏, 細田和男, 神谷歩, 金子敬輔, 榎本舞弓, 井上裕介, 窪田健二, 行木信一, 河野俊之
Organizer
第46回NMR討論会
Place of Presentation
茨城
Year and Date
2008-11-12
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[Presentation] Stabilization of proteins for solution NMR measurements2008
Author(s)
Kaori Wakamatsu, Takeshi Ishii, Long Xian, Kazuo Hosoda, Mayu Enomoto, Naoya Tochio, Shin-ichi Tate, Yusuke Inoue, Nobukazu Nameki, Toshiyuki Kohno, Kenii Kubota
Organizer
XXIIIrd International Conference on Magnetic Resonance in Biological Systems
Place of Presentation
米国, サンディエゴ
Year and Date
2008-08-24
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