2007 Fiscal Year Annual Research Report
マイクロビーズ法によるマウス・ラット感染症の微量検査法の開発
| Project/Area Number |
19200033
|
|---|
| Research Institution | University of Tsukuba |
|---|
Principal Investigator |
八神 健一 University of Tsukuba, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (40166476)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
國田 智 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 講師 (10195472)
有川 二郎 北海道大学, 大学院・医学研究科, 教授 (10142704)
大沢 一貴 長崎大学, 学内共同利用施設, 准教授 (90244756)
後藤 一雄 (財)実験動物中央研究所, ICLASモニタリングセンター, 研究員 (00205593)
池 郁生 (独)理化学研究所, バイオリソースセンター, 研究員 (40183157)
|
|---|
| Keywords | 実験動物 / 微生物モニタリング / 微量検査法 / マイクロビーズ法 / 組換え抗原 / マウス / ラット |
|---|
| Research Abstract |
平成19年度は、対象微生物の検査用抗原および陽性血清を作製した。一部の微生物では組換え抗原の作製も進めた。また、本研究に不可欠な蛍光分析装置を購入し、反応条件の検討を進めた。
1)検査用抗原パネルの作成
検査対象の微生物は、国立大学動物実験施設協議会が作成した「実験動物の授受に関するガイドライン」において微生物モニタリング対象微生物のminimum項目に分類されているMHV, Sendai virus, Ectromelia virus, LCMV, Hanta virus, Mycolasma pulmonisに加え、common項目に分類されているEDIMV, Parvovirus(MMV, MPV), TMEV, Clostridium piliformeならびに新興感染症として注目されているMNVとした。今年度は、既存のELISA法やIFA法で使用されている抗原のマイクロビーズ法への適用を検討した。組換え抗原としては、既にELISA用に開発もしくは実用化されているParvovirus(MMV-NS1, MMV-VP2, MPV-VP2), MHV-NPおよびHanta virus-NP抗原に加え、MHV-SおよびSendai virus-NP抗原を大腸菌での発現系を用いて作製し、ELISA法での一次評価後、マイクロビーズ法への適用を検討した。
2)検査用陽性血清の作製
上記微生物に対する陽性血清を、マウス・ラットを用いた感染実験により作製した。
3)反応条件の検討
作製した抗原と陽性血清、非感染陰性血清を用いて、マイクロビーズ法の反応条件を決定した。検討項目は、マイクロビーズ担体への抗原カップリング条件、至適抗原濃度、ブロッキング条件、検体血清希釈と反応条件、検出系(ビオチン標識2次抗体およびR-PE標識ストレプトアビジン)の反応条件および洗浄条件である。
|
-
-
-
[Journal Article] Specific and quantitative detection of PCR products from Clostridium piliforme, Helicobacter bilis, H. hepaticus, and mouse hepatitis virus infected mouse samples using a newly developed electro chemical DNA chip.2007
Author(s)
Goto, K., Horiuchi, H., Shinohara, H., Motegi, K., Hashimoto, K., Hongo, S., Gemma, N., Hayas himoto, N., Itch, T. and Takakura, A.
-
Journal Title
J. Microbiol. Methods. 69
Pages: 93-99
Peer Reviewed
-
[Journal Article] LCMV infection in a wild-derived inbred strain undetected by dirty bedding sentinel health monitoring and revealed after embryo transfer2007
Author(s)
Ike, F., Bourgade, F., Ohsawa, K., Sato, H., Morikawa, S., Takimoto, K., J. Jaubert, Berard, M., Nakata, H., Hiraiwa, N., Takakura, A., Itoh, T., Obata, Y., Yoshiki, A. and X. Montagutelli
-
Journal Title
Comparative Medicine 57
Pages: 272-281
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
-
