2009 Fiscal Year Annual Research Report
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19208012
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
松井 利郎 Kyushu University, 大学院・農学研究院, 准教授 (20238942)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松本 清 九州大学, 大学院・農学研究院, 教授 (80038322)
佐藤 匡央 九州大学, 大学院・農学研究院, 准教授 (90294909)
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| Keywords | ペプチド / 高血圧 / LC-MS / MS / 血管機能 / 生活習慣病 |
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| Research Abstract |
種々の生理作用が明らかにされつつある低分子ペプチドについて、特に高血圧・動脈硬化等の発症に深く関わる血管機能に対する潜在的な作用を組織レベルで評価し、さらにin vivoでの活性発現を検証した。また、前年度に構築したLC-MRM-MS/MS法を用いてジペプチドの吸収挙動を明らかにした。
1) 同位体標識LC/MS法の構築によるペプチド吸収挙動の解明:13C-Val, Ile, AlaのFmoc誘導体化並びにC末端にTyrを配置した合成ジペプチド体を用いて、新たに構築したLC-MRM-/MS/MS法による血中への吸収挙動を明らかにした。設定した最適イオン化条件において、SHRへの3種ペプチド(30mg/kg)投与後の24時間までの尾静脈採血により得られた血漿を用いて吸収量を測定した結果、いずれも1時間でのCmax(～10ng/ml)が認められ、確実に循環系へとintactに吸収されることが判明した。
2) 血管調節機能を有するペプチド体の網羅的解明:SDラット血管標本を用いた血管張力測定を実施し、血管弛緩性の認められたHRWを用いて、その活性発現要件を明らかにした。その結果、Hisのイミダゾール環をメチル化した場合、Argをシトルリン弛緩した場合において、完全にその弛緩活性が消失した。従って、低分子ペプチドによる血管弛緩作用の発現にはプロトン化された側鎖Nの存在が極めて重要であることが判明した。
3) 水溶液系でのタンパク質とペプチドとの立体的相互作用を見積もることを可能とするSYBYL/surflex-dock法を適用することにより、ACE阻害活性の程度をペプチド-ACE結合自由エネルギーから予測できることを初めて明らかにした。
4) アポE欠損マウスに対する3ヶ月にわたる長期WH投与試験を実施し、10mg/kg投与によって有意なenfaceによる抗動脈硬化作用を再度確認した。また、その構成アミノ酸のみでは全く作用は認められなかったことから、WHがペプチド体として抗動脈硬化作用を発現していることが明示できた。
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