2008 Fiscal Year Annual Research Report
実験用小型淡水魚類卵子の凍結保存:耐凍剤チャンネルの人為的発現によるアプローチ
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19300147
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| Research Institution | Kochi University |
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Principal Investigator |
葛西 孫三郎 Kochi University, 教育研究部自然科学系, 教授 (60152617)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
枝重 圭祐 高知大学, 教育研究部自然科学系, 准教授 (30175228)
越本 知大 宮崎大学, フロンティア科学実験総合センター, 教授 (70295210)
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| Keywords | 魚類 / 卵子 / 凍結保存 / 水透過性 / 耐凍剤透過性 / 水チャンネル |
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| Research Abstract |
体積が大きい、小型淡水魚の未成熟卵子の凍結保存を成功させるための方法の一つとして、より体積の小さい、未熟な卵子を用いる方法が考えられる。本年度は、まず、未熟で小型の未成熟卵子の体外成熟培養系の開発を試みた。雌ゼブラフィッシュから、Stage III終期卵子(0.65〜0.75mm)より小さい直径0.50〜0.60mmの卵子(Stage III中期卵子)を採取し、26℃の20%のウシ胎仔血清(FCS)および10IU/mLのeCGを添加した0.5%BSA添加90%LM液(pH9.0)(前培養液)中で6時間培養した。そして、26℃の1μg/mLの17α-20β-dihydrox-4-pregnen-3-on(DHP)を添加した0.5%BSA添加90%LM(pH9.0)(成熟培養液)で270分間成熟培養した。成熟率(86〜89%)と授精した後の受精率(59〜73%)は、前培養なしに直接DHP存在下で成熟培養した場合の成熟率(38%)と受精率(30%)に比べて大幅に向上した。また、一部の受精卵は培養後に孵化した(8〜13%)。したがって、Stage III終期卵子より小さいStage III中期卵子は、正常に体外成熟させることが可能であることがわかった。次に、水・耐凍剤チャンネルであるAQP3のcRNAをStage III中期卵子に注入して前培養液中で6-12時間培養して発現させ、膜透過性が向上するかどうかを調べた。その結果、Stage III中期卵子の水・耐凍剤透過性は、AQP3の発現により約2倍向上することがわかった。そこで、この卵子の成熟率、受精率、孵化率をしらべた結果、いずれもAQP3cRNAを注入しなかった卵子の値と比べて有意な差はみられなかった。AQP3を発現させたStage III中期卵子を用いた小型淡水魚卵子の凍結保存の成功が期待される。
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[Presentation] Exogenous expression of rat aquaporin-3 enhances permeability to water and cryoprotectants of immature oocytes in the zebrafish (Danio rerio).2008
Author(s)
Shinsuke Seki, Bo Jin, Tsuchiya Ryouma, Toshimitsu Kouya, Takao Hara, Delgado M. Valdez Jr., Magosaburo Kasai, Keisuke Edashige
Organizer
The 5th Annual Conference of the Asia Reproductive Biotechnology Society
Place of Presentation
Horizon Hotel, Kunming, Yunnan Province, China
Year and Date
20081127-20081201
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[Presentation] ウシ桑実胚の水透過と耐凍剤透過におけるaquaporin 3の役割2008
Author(s)
河合 泰典, 原 隆夫, 松尾完, Valdez M. Delgado Jr., 金 波, 好村 正博, 東山 龍一, 市川 恭子, 恒石 望太郎, 枝重 圭祐, 葛西 孫三郎
Organizer
第101回日本繁殖生物学会
Place of Presentation
福岡県福岡市九州大学医学部
Year and Date
20080918-20080920
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[Presentation] Short-term storage of vitrified two-cell mouse embryos at-80℃ for handy transportation with dry ice.2008
Author(s)
Bo Jin, Eri Hotta, Yukiko Kobayashi, Shinsuke Seki, Masahiro Yoshimura, Hiroshi Honda, Keiji, Mochida, Atsuo Ogura, Magosaburo Kasai, Keisuke Edashige
Organizer
第101回日本繁殖生物学会
Place of Presentation
福岡県福岡市九州大学医学部
Year and Date
20080918-20080920
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[Presentation] Permeability to water and cryoprotectants of zebrafish (Danio Rerio) oocytes at mid stage III.2008
Author(s)
Delgado M. Valdez, Jr., Ryoma Tsuchiya, Shinsuke Seki, Naoya Saida, Bo Jin, Masahiro Yoshimura, Chihiro Koshimoto, Magosaburo Kasai, Keisuke Edashige
Organizer
The 45th Annual Meeting of the Society for Cryobiology
Place of Presentation
The Omni Charlotte Hotel, Charlotte, NC, USA
Year and Date
20080620-20080623
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[Presentation] The pathway for the movement of water and cryoprotectants in bovine oocytes and embryos.2008
Author(s)
Keisuke Edashige, Takao Hara, Yasunori Kawai, Masahiro Yoshimura, Bo Jin, Delgado M. Valdez, Jr., Magosaburo Kasai
Organizer
The 45th Annual Meeting of the Society for Cryobiology
Place of Presentation
The Omni Charlotte Hotel, Charlotte, NC, USA
Year and Date
20080620-20080623
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