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2008 Fiscal Year Annual Research Report

自律型マイクロチップによるPCRレス・SNPタイピング

Research Project

Project/Area Number 19310086
Research InstitutionThe Institute of Physical and Chemical Research

Principal Investigator

細川 和生  The Institute of Physical and Chemical Research, 前田バイオ工学研究室, 専任研究員 (00373366)

Keywordsマイクロチップ / 電気泳動 / DNA / 一塩基多型 / テーラーメイド医療 / 増幅
Research Abstract

本課題の目的は,独自の自律型マイクロチップを用いることにより,PCR不要の簡便な遺伝子識別法を実現することであった.昨年度までは電気泳動でこの目的を達成する方針であったが,検出感度が思うように向上しなかったため,本年度は方針を変更し,自律型マイクロチップの流路壁面で標的DNAを捕捉した後,独自の「層流樹状増幅法」を用いて信号を増強することにより,高感度検出を達成することとした.
まず末端をビオチン化した21塩基のDNAを標的として条件の最適化を行なった.標的と相補的な30塩基のプローブDNAをガラス基板上に固定化した後,Y字型流路を加工したPDMS基板を接合してマイクロチップを完成した.流路にサンプルを注入して標的DNAを補足した後,増幅試薬(蛍光標識アビジンとビオチン化抗アビジン抗体)を注入することにより信号増幅した.結果として1.7pMの検出限界が得られ,これは増幅しない場合に比べて1000倍以上高感度であった.
次にサンドイッチ法を適用することにより,非標識56塩基DNA中のSNP識別を試みた.標的配列はヒトCYP2D6遺伝子とした.上記と同様に標的DNAを捕捉し,さらにSNP識別用のビオチン化プローブDNAを結合させた後,増幅を行なった.この場合は特異性を上げた分,感度は若干犠牲となり,検出限界は10pM程度となった.検出に要した時間は25分であった.本マイクロチップで使用する試料体積はわすか1μLなので,上記検出限界をDNA分子数に換算すると10^6-10^7コピーとなり,これはヒト血液0.1-1mLに含まれるDNA分子数と同等であるので,この血液サンプル中のDNAを完全に抽出,濃縮できれば,本法によるPCRレス・SNPタイピングが原理的に可能であることが示された.

  • Research Products

    (13 results)

All 2009 2008 Other

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (11 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Spatial distribution of laminar flow-assisted dendritic amplification2009

    • Author(s)
      細川和生
    • Journal Title

      Lab on a Chip 9

      Pages: 464-468

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] DNAナノ構造体による金ナノ粒子上でのオリゴDNA固定化位置の制御2009

    • Author(s)
      鈴木健二
    • Organizer
      日本化学会第89春季年会
    • Place of Presentation
      船橋
    • Year and Date
      2009-03-27
  • [Presentation] マイクロチップアフィニティー電気泳動によるキナーゼ活性の測定2009

    • Author(s)
      韓愛善
    • Organizer
      日本化学会第89春季年会
    • Place of Presentation
      船橋
    • Year and Date
      2009-03-27
  • [Presentation] マイクロチップ用の新規信号増幅法LFDAとその高感度DNAセンサーへの応用2009

    • Author(s)
      細川和生
    • Organizer
      日本化学会第89春季年会
    • Place of Presentation
      船橋
    • Year and Date
      2009-03-27
  • [Presentation] Characterization of laminar flow-assisted dendritic amplification2008

    • Author(s)
      細川和生
    • Organizer
      The 12th International Conference on Miniaturized Systems for Chemistry and Life Science
    • Place of Presentation
      San Diego, USA
    • Year and Date
      2008-10-12
  • [Presentation] AC electrokinetic phase separation, focusing and concentration in microchannel2008

    • Author(s)
      佐々木直樹
    • Organizer
      The 12th International Conference on Miniaturized Systems for Chemistry and Life Science
    • Place of Presentation
      San Diego, USA
    • Year and Date
      2008-10-12
  • [Presentation] SNP検出のためのマイクロチップ電気泳動における補助DNAの利用2008

    • Author(s)
      韓愛善
    • Organizer
      日本分析化学会第57年会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      2008-09-10
  • [Presentation] 交流動電相分離とその濃縮操作への応用(2):濃縮機構の検討2008

    • Author(s)
      佐々木直樹
    • Organizer
      日本分析化学会第57年会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      2008-09-10
  • [Presentation] 自律駆動マイクロチップと新規信号増幅法を利用したDNAセンサー2008

    • Author(s)
      佐藤貴寛
    • Organizer
      日本分析化学会第57年会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      2008-09-10
  • [Presentation] マイクロチップ用の信号増幅法LFDAにおける増幅産物の空間分布2008

    • Author(s)
      細川和生
    • Organizer
      日本分析化学会第57年会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      2008-09-10
  • [Presentation] 交流動電相分離とその濃縮操作への応用2008

    • Author(s)
      佐々木直樹
    • Organizer
      第17回化学とマイクロ・ナノシステム研究会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      2008-05-10
  • [Presentation] 補助DNAを利用したマイクロチップ電気泳動によるSNP検出2008

    • Author(s)
      韓愛善
    • Organizer
      第17回化学とマイクロ・ナノシステム研究会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      2008-05-10
  • [Remarks]

    • URL

      http://www.riken.jp/lab-www/bioengineering/index.htm

URL: 

Published: 2010-06-11   Modified: 2016-04-21  

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