2008 Fiscal Year Annual Research Report
レーザーインジェクションによる標的真核細胞およびオルガネラの遺伝子発現制御
| Project/Area Number |
19370017
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
東山 哲也 Nagoya University, 理学研究科, 教授 (00313205)
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| Keywords | レーザーインジェクション / マイクロインジェクション / モルフォリノアンセチョセンスオリゴ / 植物培養細胞 / 雌性配偶体 / 花粉管ガイダンス / 遺伝子発現阻害 / 抗体 |
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| Research Abstract |
昨年度に実用化(販売開始)を行ったレーザーインジェクターを用いて、植物の雌性配偶体細胞(トレニアの裸出胚嚢)へのモルフォリノアンチセンスオリゴのインジェクションによる遺伝子発現阻害実験を中心に進めた。レーザーマイクロインジェクション法の評価・最適化を進めた結果、標的とした花粉管誘引物質の候補遺伝子の遺伝子発現阻害に成功し、候補遺伝子が真の花粉管誘引物質であることを証明できた。同定した遺伝子は2種あり、それぞれLURE1およびLURE2という、ディフェンシンに類似した低分子量タンパク質である。そのそれぞれの遺伝子に対する特異的なアンチセンスオリゴを導入した場合、アンチセンス特異的に花粉管誘引が阻害された。また、それぞれのアンチセンスオリゴ単独で、誘引が阻害されたことから、それぞれの遺伝子が異なる機能を持つ可能性も考えられる。その成果は、Nature誌に掲載せれ、表紙を飾った。植物細胞においてモルフォリノアンチセンスオリゴの初めての使用例としても、メーカーから紹介された。現在、特異的に目的遺伝子の発現量が減少しているか、リアルタイムRT-PCR解析の条件検討を進めている。本年度にコントロールとなる遺伝子も取得でき、細胞2個に由来するmRNAから、cDNA増幅を介して、安定してリアルタイムRT-PCR解析が行えるようになった。今後、個々のサンプルでの標的遺伝子の発現量を調べ、この実験系が遺伝子発現抑制のモデル系として利用できるか、明らかにする。
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[Presentation] 花粉管誘引物質の同定2008
Author(s)
東山哲也, 奥田哲弘, 筒井大貴, 椎名恵子, 武内秀憲, 金岡雅浩, 佐々木成江
Organizer
日本植物学会第72 回大会
Place of Presentation
高知
Year and Date
2008-09-26
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[Presentation] ミトコンドリア核内の機能領域を構成するタンパク質の解析2008
Author(s)
伊藤喜重, 泉亜紀子, 森稔幸, 前田桂, 由比良子, 堂前直, 東山哲也, 黒岩常祥, 室伏きみ子, 河野重行, 佐々木成江
Organizer
日本植物学会第72回大会
Place of Presentation
高知
Year and Date
2008-09-25
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