2007 Fiscal Year Annual Research Report
巨核球の分化・成熟に関与する転写因子群の機能解析と血小板減少症モデルマウスの作成
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19390022
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
土井 健史 Osaka University, 薬学研究科, 教授 (00211409)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡田 欣晃 大阪大学, 薬学研究科, 助教 (50444500)
仲野 徹 大阪大学, 生命機能研究科, 教授 (00172370)
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| Keywords | 巨核球 / 血小板 / 分化 / 転写因子 / Hprt ターゲティング法 / ES細胞 / OP9 |
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| Research Abstract |
我々はこれまでに血小板の分化成熟に関与する転写因子の候補として11種の転写因子を同定している。今年度は、これらの転写因子が血小板の分化成熟にどのような役割を担っているかを評価する実験系の構築を行った。本実験系は、血小板系列特異的に転写因子を強制発現できるES細胞を樹立し、それをOP9ストローマ細胞の上で血小板に分化させ、転写因子の強制発現が血小板分化に及ぼす影響を評価するシステムである。今回、11種の転写因子の候補のうち、分化への関与が高いと考えられた、RUNX1とその変異体、及びMEIS1を強制発現するためのES細胞の樹立を行った。まず、RUNX1とその変異体を2種,MEIS1及びコントロールとしてのGFPの計4種の遺伝子の上流に、血小板特異的なプロモーターであるPF4プロモーターを連結し、さらに上記遺伝子の下流にpolyAシグナルを配置したトランスジーンを作成し、これらを用いて相同組み換えを行うためのターゲッティングベクターを構築した、これらのベクターをES細胞株(BK4細胞)に導入し、ゲノムを組み替えた結果、 RUNX1で4クローン、RUNX1変異体でそれぞれ4クローンずつ、MEIS1で3クローン、GFPで6クローンの相同組み換え体を得ることに成功した。次に、コントロールであるGFP導入ES細胞をOP9細胞上に播種し、トロンボポエチン、IL-6,IL-11を加えて血小板への分化誘導を行ったところ、培養14日後に蛍光を発する細胞を確認することに成功した。現在、分化の効率を高めるための培養条件の最適化を引き続き行っている。
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