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2008 Fiscal Year Annual Research Report

消化管におけるTヘルパー2型サイトカインの組織障害作用機転の解明

Research Project

Project/Area Number 19390204
Research InstitutionResearch Institute, International Medical Center of Japan

Principal Investigator

土肥 多惠子  Research Institute, International Medical Center of Japan, 消化器疾患研究部, 部長 (60250221)

KeywordsIL-13 / IL-4 / 消化管上皮細胞
Research Abstract

IL-13結合蛋白の分離・同定を目的として、細胞・組織膜画分抽出液からのIL-13結合蛋白のアフィニティ精製を試みた。抗Hisモノクローナル抗体をセファロースビーズに結合させ、昨年度までに作製したHistag-IL-13を混合したのちビーズを洗浄してIL-13を固層化した。蛋白精製源として3Gy放射線照射後3日目のIL-4受容体欠損マウスの小腸を用いた。これまでの結果より、この組織においてはIL-13の分泌と組織傷害が強く、かつIL-13と高親和性で結合するIL-13Rα2の発現はほとんどないことがわかっている。これまでの結果で受容体は上皮・間質のいずれにも存在する可能性があるので、小腸全体から膜画分を抽出した。Histag-IL-13と膜抽出画分を4℃でovernight混合した。洗浄の後、1)6-Hisペプチド、2)0.1Mグリシン+40mMジエチルアミンpH2.8によるchemical elution3)pH11でのchemical elutidnを行った後、結合ビーズもサンプルバファーで処理し、電気泳動を行ってCypro Ruby染色により観察した。その結果、Hisポリマーによってビーズから遊離するバンドが検出された。候補分子と考えられるバンドについては直接マススペクメトリーを試みたが、同定に至らずサンプル量を増加させる必要があると考えられた。その特異性についても現在さらに膜画分の抽出条件、IL-13Hisとの結合条件を修飾して検討中である。一方前年度に引き続きIL-13の傷害作用を組織primary cultureで解析していたところ、既知のサイトカインシグナル経路とクロストークしている可能性を示唆する結果が得られたため、この点の検討も開始している。

  • Research Products

    (7 results)

All 2009 2008

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (5 results)

  • [Journal Article] TWEAK/Fn14 Pathway : a nonredundant role in intestinal damage in mice through a TWEAK/intestinal epithelial cell axis2009

    • Author(s)
      T. Dohi
    • Journal Title

      Gastroenterology 136

      Pages: 912-923

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] DNA hypermethylation contributes to incomplete synthesis of carbohydrate determinants in gastrointestinal cancer2008

    • Author(s)
      Y. I. Kawamura
    • Journal Title

      Gastroenterology 135

      Pages: 142-151

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Inflammation-associated transcriptional silencing of Sda carbohydrate-synthase gene by DNA hypermethylation in ulcerative colitis2008

    • Author(s)
      Y I. Kawamura
    • Organizer
      Biochemistry and Molecular Biology (BMB) 2008
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2008-12-11
  • [Presentation] IL-13 disrupts tight junction in the intestinal epithelial cells by modulating expression of ZO-1, occludin and claudin-22008

    • Author(s)
      Kawashima R
    • Organizer
      第38回日本免疫学会学術集会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2008-12-02
  • [Presentation] Comprehensive analysis of lectin-binding in the colitis and colitis-associated tumors in mice2008

    • Author(s)
      Vongsavanh P
    • Organizer
      第67回日本癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      名古屋
    • Year and Date
      2008-10-28
  • [Presentation] Interleukin-13 Induces Tissue Damage with Relocation of β-Catenin and Modification of Cell-Cell Adhesion in the Epithelial Cells2008

    • Author(s)
      Kawashima R
    • Organizer
      Digestive Disease Week 2008
    • Place of Presentation
      San Diego, U. S. A.
    • Year and Date
      2008-05-18
  • [Presentation] Tweak/Fn14 Pathway : Role in the Intestinal Inflammation and Tissue Repair2008

    • Author(s)
      Dohi T
    • Organizer
      Digestive Disease Week 2008
    • Place of Presentation
      San Diego, U. S. A.
    • Year and Date
      2008-05-18

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Published: 2010-06-11   Modified: 2016-04-21  

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