2008 Fiscal Year Annual Research Report
嗅粘膜由来幹細胞とその嗅神経グリア分化誘導および脊髄損傷治療モデルの確立
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19500275
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
松崎 有未 Keio University, 医学部, 准教授 (50338183)
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| Keywords | 嗅粘膜 / OEC / 神経堤 |
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| Research Abstract |
【目的】Olfactory ensheathing cell(OEC)は、脊髄損傷の移植療法として注目されているが、基礎的研究は不十分である。我々はOECの基礎的性質を明らかにするために以下の実験を行った。
【OECの軸策伸展能力とその治療効果】ラット嗅粘膜から精製したOECを用いて限界希釈培養法でクローン群を作成し、神経細胞の軸策伸展を促す能力を調べた。軸策伸展能の高いクローンと低いクローンを選択し、ラット胸髄圧挫損傷モデルに移植した。移植後8週間は運動機能を評価し、その後免疫染色で組織を評価した。いずれのクローンも注入部付近に生着していた。軸策伸展能の高いクローンを移植した群は、培養液のみを注入した対照群より有意に高い運動機能回復を認めたが、伸展能の低いクローンを移植した群との有意差はみられず、OECの治療効果は軸策伸展能の単独効果ではないことが示唆された。
【OEC発生源】従来OECは嗅板から発生するとされてきた。今回我々は、神経堤由来の細胞がGFPを発現するWnt1-Cre/loxP EGFP transgenic mouseの嗅覚系を観察して、OECが存在する領域にGFPの発現を認めた。さらに免疫染色でこれらGFP陽性細胞がOECマーカーを発現していることから、OECが神経堤由来である可能性が高いと考えている。
【嗅粘膜sphere】嗅粘膜細胞をneurosphere法で培養すると、継代可能なsphereが形成された。PO-CreおよびWnt1-Cre/loxP EGFP transgenic mouseの嗅粘膜から培養されたsphereはGFP陽性であり、RT-PCRで神経堤由来組織に認められるmRNAの発現が確認できたことから、sphereが神経堤由来の細胞で構成されることが判明した。このsphereを血清培地で培養すると、OECマーカーを発現する細胞の分化が認められ、嗅粘膜由来sphereがOECの供給源になりうることが示された。
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