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2007 Fiscal Year Annual Research Report

核内受容体を介さないレチノイン酸の作用機構の解明とその応用研究

Research Project

Project/Area Number 19590085
Research InstitutionHoshi University

Principal Investigator

高橋 典子  Hoshi University, 薬学部, 教授 (50277696)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 大庭 紀宏  星薬科大学, 薬学部, 助手 (50409364)
KeywordsビタミンA酸 / レチノイレーション / HL60細胞 / レチノイル化 / レチノイン酸 / 蛋白質修飾 / 免疫染色 / 検出法
Research Abstract

ビタミンA酸(レチノイン酸,RA)の核内受容体を介さない新作用機構であるRAによる蛋白質の修飾反応(レチノイレーション・レチノイル化)を解明するために,RA抗体を用いる新規レチノイル化蛋白質高感度検出法の最適化を従来法と比較して行った。RA或いは放射標識[3H]-RAを処理したHL60細胞から調製した総細胞蛋白質を二次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動(2D-PAGE)により分離した後,前者に対してはゲル中の蛋白質を膜に転写後RA抗体を用いて免疫染色を行い,後者に対しては増感・乾燥したゲルを一定期間フィルムに露光後,現像して可視化した。2D-PAGEパターンを比較したところ,両者は類似していた。次に,RAを処理した肌60細胞を破砕・超遠心して得られた上清(可溶性画分),及び,その沈殿物をCHAPS含有緩衝液中で再度破砕・遠心して得られた上清(沈殿画分)を調製し,両画分の蛋白質をMono Qカラムにより分離した。得られた各フラクション中の蛋白質について,一次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動(1D-PAGE)により分離し,次いでRA抗体を用いて免疫染色を行ったところ,従来法で同定されたレチノイル化蛋白質をRA抗体によっても検知することができた。また,可溶性画分,沈殿画分中にRA抗体により検出された新規レチノイル化蛋白質が含まれることが明らかになったので,それら蛋白質の同定を現在行っている。以上の結果から,従来,放射標識[3H]-RAを用いたオートラジオグラフィー法で長期間を要して可視化されていたレチノイル化蛋白質は,RA抗体を用いる方法により,短時間で高感度に検出できることが明らかになった。

  • Research Products

    (11 results)

All 2008 2007

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (8 results)

  • [Journal Article] p-Dodecylaminophenol derived from the synthetic retinoid,fenretinide:Antitumorefiicacy in vitro and in vivo against human prostate cancer and mechanism of action2008

    • Author(s)
      Noriko Takahashi, Yusuke Watanabe, Ybshie Maitani, Takayasu Yamauchi, Kimio Higashiyama, and Toshihiro Ohba
    • Journal Title

      Int.J.Cancer 122

      Pages: 689-698

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Potent anticancer activities of novel aminophenol analogues against various cancer cell lines.2007

    • Author(s)
      Ohba T, Yamauchi T., Higashiyama K., and Talaahashi N.,
    • Journal Title

      Bioorg Med Chem 15

      Pages: 847-53

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Vitamin A and proteomics for new drug development,2007

    • Author(s)
      Noriko Takahashi
    • Journal Title

      The Proceedings of the Hoshi University 49

      Pages: 125-133

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] p-DDAPの神経芽腫に対する抗腫瘍作用2008

    • Author(s)
      江川留美、大庭紀宏、古賀晋一郎、今泉益栄、高橋典子
    • Organizer
      日本薬学会第128年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      20080326-29
  • [Presentation] ビタミンA酸によるin vitroタンパク質修飾反応とSH還元剤2008

    • Author(s)
      安西 智子、大庭 紀宏、久保 義典、和田 将志、高橋典子
    • Organizer
      日本薬学会第128年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2008-03-27
  • [Presentation] Ras蛋白質のファルネシル化へのレチノイン酸の影響2007

    • Author(s)
      深澤 悠太、内藤 まどか、大庭 紀宏、高橋 典子
    • Organizer
      BMB2007(第30回日本分子生物学会年会、第80回日本生化学会大会、合同大会)
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2007-12-12
  • [Presentation] アクチニンのレチノイン酸作用への介入2007

    • Author(s)
      山田 千穂、大庭 紀宏、高橋 典子
    • Organizer
      BMB2007(第30回日本分子生物学会年会、第80回日本生化学会大会、合同大会)
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2007-12-12
  • [Presentation] マウス皮膚の細胞外マトリックス分解酵素とレチノイレーション2007

    • Author(s)
      藤生 泰範、高須 真吾、大庭 紀宏、高橋 典子
    • Organizer
      BMB2007(第30回日本分子生物学会年会、第80回日本生化学会大会、合同大会)
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2007-12-12
  • [Presentation] N-(4-Hydroxyphenyl)retinamideの新規誘導体の前立腺癌に対する抗腫瘍作用とその作用機構2007

    • Author(s)
      大庭 紀宏、渡邊 祐介、高橋 典子
    • Organizer
      BMB2007(第30回日本分子生物学会年会、第80回日本生化学会大会、合同大会)
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2007-12-11
  • [Presentation] 二段階反応で進行するビタミンA酸による蛋白質修飾(レチノイレーション)2007

    • Author(s)
      大庭 紀宏、安西 智子、久保 義典、高橋 典子
    • Organizer
      フォーラム2007:衛生薬学・環境トキシコロジー
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      2007-11-01
  • [Presentation] Examination of two-step protein modification by rethloic acid(retinoylation)2007

    • Author(s)
      Noriko Takaliashi, Yoshinori Kubo, and Toshihiro Ohba
    • Organizer
      Experimental Biology2007, ASBMB Aunual Meeting
    • Place of Presentation
      WashingtonD.C.
    • Year and Date
      2007-04-30

URL: 

Published: 2010-02-04   Modified: 2016-04-21  

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