| Research Abstract |
我々は,分子シャペロンHsp90がDNA損傷応答に関わる種々のタンパク質の細胞内動態を制御することにより,複製ストレス応答に関与することを見いだしている。今回,Y-family DNA polymeraseの一つPolηについて詳細な解析をおこない,以下の知見を得た。1)EGFP-Polηを安定に発現するHEK293T細胞を用いて免疫沈降をおこなったところ,Hsp90はPolnと特異的に結合し,この結合はHsp90阻害剤2)17-AAGで抑制された。また,ウサギ網状赤血球抽出液で合成されたPolηを用いても同様の結果が得られた。17-AAGは,紫外線照射によるPolηの複製フォーカスへの集積を抑制した。
これらの結果は,Hsp90がPolηの機能を制御することを示唆する。Polηは,紫外線照射で生じる細胞の複製ストレス応答(細胞死,突然変異,細胞周期)に重要な役割を果たしている。従って,Hsp90阻害は,これらの複製ストレス応答に影響を与えることが考えられる。そこで,紫外線による複製ストレス応答におけるHsp90阻害の影響を調べ,次の知見を得た。1)Hsp90阻害により,HeLa,HEK293T細胞の紫外線に対する感受性が増し,細胞死がfi進した。2)SupFシャトルベクター法を用いて,紫外線誘発突然変異率を解析したところ,Hsp90阻害は細胞に導入されたベクターの変異率を増加させた。現在HPRT遺伝子を指標にして,Hsp90阻害がゲノムDNAの変異率に影響を与えるか実験を進めている。3)低強度紫外線照射による細胞周期のS期での遅延が,Hsp90阻害した細胞では増強した。
以上の結果は,Hsp90がPolηの制御を介し,紫外線による複製ストレス応答に関与する可能性を強く示唆する。
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