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2008 Fiscal Year Annual Research Report

新規ニトログアノシン環状一リン酸の生体内生成とそのNOシグナルへの関与

Research Project

Project/Area Number 19590312
Research InstitutionKumamoto University

Principal Investigator

澤 智裕  Kumamoto University, 大学院・医学薬学研究部, 准教授 (30284756)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 岡本 竜哉  熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 助教 (30419634)
赤池 孝章  熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 教授 (20231798)
Keywords酸化ストレス / 一酸化窒素 / レドックス / シグナル伝達 / 適応応答 / 活性酸素
Research Abstract

8-ニトログアノシン3',5'-サイクリックーリン酸(8-ニトロcGMP)は、一酸化窒素生成に依存して細胞内に生成する新規な環状ヌクレオチドであり、蛋白質のチオール基に対して付加反応を起こし、蛋白質8-チオールcGMP付加体を形成する(蛋白質S-グアニル化)。本研究では、8-ニトロcGMPとチオール基との反応メカニズムを解析するとともに、その細胞シグナルへの影響を解析することを目的としている。平成20年度は、蛋白質S-グアニル化について、質量分析に基づく解析手法の検討を行った。タンパク質モデルとして、組換えKeap1を用いた。すでに我々は、Keap1がS-グアニル化の細胞内標的タンパク質の一つであることを明らかにしている(Nature Chem.Bio1.,3,727,2007)。組換えKeap1を8-nitro-cGMPと反応させ、S-グアニル化Keap1を得た。それをトリプシン消化し、S-グアニル化システインを含むペプチド断片を作成した。抗S-グアニル化抗体を結合した抗体カラムを作成し、それを用いてS-グアニル化ペプチドを選択的に精製・濃縮した後、質量分析に供した。質量分析は、MALDI-TOF-MSおよびLC-ESI-MSにより行った。推定分子量と一致していたペプチドについては、さらにMSMS解析を行い、S-グアニル化ペプチドであることを確認した。特に、S-グアニル化ペプチドでは、cGMP構造に特徴的で優先的な解裂・脱離が起こっており、これを指標にS-グアニル化ペプチドを容易に同定できることが分かった。本手法は、新しい翻訳後修飾である蛋白質S-グアニル化の解析に有用であることが示された。

  • Research Products

    (12 results)

All 2009 2008 Other

All Journal Article (10 results) (of which Peer Reviewed: 10 results) Book (1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Cytoprotective function of heme oxygenase-1 induced by a nitrated cyclic nucleotide formed during murine salmonellosis.2009

    • Author(s)
      Zaki MH, et al.
    • Journal Title

      J Immunol 182

      Pages: 3746-3756

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] S-nitrosylated human serum albumin-mediated cytoprotective activity is enhanced by fatty acid binding.2008

    • Author(s)
      Ishima Y, et al.
    • Journal Title

      J Biol Chem 283

      Pages: 34966-34975

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 8-Nitroguanosines as chemical probes of the proteinS-guanylation.2008

    • Author(s)
      Saito Y, et al.
    • Journal Title

      Chem Commun

      Pages: 5984-5986

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Suppression of NO production and 8-nitroguanosine formation by phenol-containing endocrine-disrupting chemicals in LPS-stimulated macrophages : Involvement of estrogen receptor-dependent or -independent pathways.2008

    • Author(s)
      Yoshitake J, et al.
    • Journal Title

      Nitric Oxide 18

      Pages: 223-228

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Angiopoietin-related growth factor enhances blood flow via activation of the ERK1/2-eNOS-NO pathway in a mouse hind-limb ischemia model.2008

    • Author(s)
      Urano T, et al.
    • Journal Title

      Arterioscler Thromb Vase Biol 28

      Pages: 827-834

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Nitric oxide produced in Peyer's patches exhibits antiapoptotic activity contributing to an antimicrobial effect in murine salmonellosis.2008

    • Author(s)
      Alam MS, et al.
    • Journal Title

      Microbiol Immunol 52

      Pages: 197-208

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Identification of the Major Antigenic Protein of Helicobacter cinaedi and the Immunogenicity During Infections in Humans.2008

    • Author(s)
      Iwashita H, et al.
    • Journal Title

      Clin Vaccine Immunol 15

      Pages: 513-521

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Mutagenicity of 8-nitroguanosine, a product of nitrative nucleoside modification by reactive nitrogen oxides, in mammalian cells.2008

    • Author(s)
      Kaneko K, et al.
    • Journal Title

      Cancer Lett 262

      Pages: 239-247

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 活性酸素を消去する物質8-ニトロcGMP.2008

    • Author(s)
      澤 智裕, 他
    • Journal Title

      検査と技術 36

      Pages: 678-679

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 感染病態におけるNO・活性酸素のシグナル伝達機能 : 酸化ストレスとその適応応答の分子メカニズム.2008

    • Author(s)
      岡本竜哉, 他
    • Journal Title

      Allergy From the Nose to the Lung 6

      Pages: 12-17

    • Peer Reviewed
  • [Book] 酸化ストレスの医学2008

    • Author(s)
      澤 智裕, 赤池 孝章
    • Total Pages
      384
    • Publisher
      診断と治療社
  • [Remarks]

    • URL

      http://kumadai-bisei.com

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Published: 2010-06-11   Modified: 2016-04-21  

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