mRNAイメージングによる白血病治療後の微少残存生細胞の同定法と網羅的な特性解析

2008 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19590552
• Research Institution: Hamamatsu University School of Medicine
• Principal Investigator: 竹下 明裕 Hamamatsu University School of Medicine, 医学部, 准教授 (00242769)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 前川 真人 浜松医科大学, 医学部, 教授 (20190291) ; 竹下 香 浜松医科大学, 医学部附属病院, 医員 (30397393)
• Keywords: 白血病細胞 / mRNA / flow cytometry

Research Abstract

特定の白血病細胞の分画の検出と分離を施行するため、細胞内のmRNAの染色を試みた。QUAL/FRET (quenched autoligating/fluorescence resonance energy transfer)法を改良し、蛍光probeの導入技術や反応時間の調整など多方面の改良を施行した。標的分子(RNA)をWT1とし、白血病細胞の同定と分離を生細胞の状態で行うことを試みた。作成されたprobeの細胞膜の透過性を一時的に高めるためStreptlysin O (SLO)を使用した。SLOの至適濃度の決定に関しては細胞や試薬の状態などによる再現性の低下を防止するため、probe導入前にSLOの処理濃度の最適化実験を行い、flow cytometryにて検討した。培養細胞では細胞内蛍光の増加を認めた。しかし、WT1の発現が本来非常に弱いとされている正常のリンパ球における蛍光がprobe量の増加とともに増加した。このためnon-specificな蛍光をより除去する必要性がでてきた。Non-specificな蛍光の原因を検討するため、分子量を変えたprobeを設計して細胞内に導入した。その原因の1つとして3次構造上のdonor probeとacceptor probeの位置関係と蛍光物質自体の特性が考えられた。また核内へのprobeの移行も考えられたため、probeに接着させる蛍光物質の量を変化させ検討している。

Research Products

• [Journal Article] Effective blood utilization via system for massive blood trans fusion, including cardiovascular operation in local areas (2009)
  • Author(s): Takeshita A, Asai T, Murakami M, Fujihara H, Ishizuka T, Nakai S, Yamada C, Suzumura T, Uchiyama Y, Maekawa M, Shigeno K, Washiyama N, Yamashita K, Unno N, Shinjo K.
  • Journal Title: Jap J Transfusion and Cell Therapy 55 Pages: 64-67
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Phase I/II study of humanized anti-CD33 antibody conjugated with calicheamicin, gemtuzumab ozogamicin, in relapsed or refractory acute my eloid leukemia : Final results of Japanese multi-center cooperative study (2009)
  • Author(s): Kobayashi Y, Naito K, Takeshita A, Morishima Y, Ogura M, Besso H, Hotta T, Mitani K, Takeuchi H, Miyawaki S, Naoe T, Ohno R
  • Journal Title: Int J Hematol (in press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] CMC544 (inotuzumab ocogamicin), an ati-CD22 immuno-conjugate of calicheamicin, alters the levels of target molecules of malignant B- cells (2009)
  • Author(s): Takeshita A, Yamakage N, Shinjo K, Ono T, Hirano I, Nakamura S, Shigeno K, Tobita T, Maekawa M, Kiyoi H, Naoe T, Ohnishi K, Sugimoto Y, Ohno R
  • Journal Title: Leukemia (in press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] CMC-544 (inotuzumab ozogamicin) shows less effect on multidrug resistant cells : analyses in cell lines and cells from patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia and lymphoma (2009)
  • Author(s): Takeshita A, Shinjo K, Yamakage N, Ono T, Hirano I, Matsui H, Nakamura S, Shigeno K, Tobita T, Maekawa M, Kiyoi H, Naoe T, Ohnishi K, Sugimoto Y, Ohno R
  • Journal Title: Br J Hematol (in press)
  • Peer Reviewed
• [Presentation] A Randomized Trial Comparing Individualized Vs. Non-Individualized Treatment for Elderly Acute Myeloid Leukemia : JALSG GML200 study (2008)
  • Author(s): Wakita A, Ohtake S, Takada S, Yagasaki F, Komatsu H, Miya zaki Y, Kubo K, Kimura Y, Takeshita A, Adachi Y, Kiyoi H, Yamaguchi T, Yoshida M, Ohnishi K, Miyawaki S, Naoe T, Ueda R, Ohno R
  • Organizer: American Society of Hematology
  • Place of Presentation: Sanfrancisco, USA
  • Year and Date: 2008-10-05
• [Presentation] The usefulness of the expected elevation value of serum albumin before replacement therapy (2008)
  • Author(s): Fujihara H, Takeshita K, Nakai S, Yamada C, Suzumura T, Uchiyama S, Takeshita A
  • Organizer: American Association of Blood Banking
  • Place of Presentation: Montreal, Canada
  • Year and Date: 2008-05-10
• [Book] 腫瘍内科 (2009)
  • Author(s): 竹下明裕, 直江知樹
  • Total Pages: 62-71
  • Publisher: 科学評論社
• [Book] Annual review (2009)
  • Author(s): 竹下明裕
  • Total Pages: 130-138
  • Publisher: 中外医学社
• [Book] medicina (2008)
  • Author(s): 竹下明裕
  • Total Pages: 2236-38
  • Publisher: 医学書院
• [Book] 周産期医学 (2008)
  • Author(s): 竹下明裕
  • Total Pages: 817-822
  • Publisher: 東京医学社