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2008 Fiscal Year Annual Research Report

ナノ抗体を分子認識単位とする生理活性ハプテンの高感度モニタリングシステムの開発

Research Project

Project/Area Number 19590576
Research InstitutionKobe Pharmaceutical University

Principal Investigator

小林 典裕  Kobe Pharmaceutical University, 薬学部, 教授 (90205477)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 小山 淳子  神戸薬科大学, 薬学部, 講師 (60102109)
森田 いずみ  神戸薬科大学, 薬学部, 助手 (20299085)
Keywordsナノ抗体 / 単一ドメイン抗体 / 分子認識 / ハプテン / エストラジオール / イムノメトリックアッセイ
Research Abstract

生体内には極微量で生理作用を発揮する低分子化合物(ハプテン)が数多く存在する.これらの体液中レベルの測定は臨床化学において重要であるが,高い感度を得ることが難しい.そこで,「ナノ抗体」,すなわち,シングルドメイン抗体(sdAb)を新しい分子認識単位として導入し,ハプテンの高感度モニタリングシステムの構築を検討した.SdAbとは,ラクダ由来の抗体のH鎖可変部ドメイン(V_HH)あるいはそれを模倣した変異体で,抗原結合活性を保持する最小の抗体フラグメントである.
昨年度,エストラジオール(E_2)に対するマウスモノクローナル抗体のV_H遺伝子をクローニングして大腸菌内で発現させて,マウスV_Hドメインそのものである野生型sdAb(V_H)を調製し,E_2-ウシ血清アルブミン(BSA)結合体に親和性を示すことを確認した.今年度は,まず,マウス抗ジゴキシン(Dig)抗体のV_H遺伝子からsdAb(V_H)を作製したが,Digに対して明瞭な結合能を示さず,マウスV_HをsdAb化するうえで,その適否は抗体枠組み配列(FR)の構造に依存することが示唆された.また,上記抗E_2抗体のV_L遺伝子から構築したsdAb(V_L)も,sdAb(V_H)より弱いもののE_2基への結合能を示した.つぎに,野生型抗E_2-sdAb(V_H)の結合力と大腸菌での発現量を改善するために,そのFRにラクダV_HHに特有のアミノ酸を導入した.その結果,発現量が400倍も向上した変異sdAbを見出したが,E_2基への結合能はむしろ低下していた.マウスV_Hに由来する抗ハプテンsdAbの調製としては本研究が初めての報告であるが,分析試薬として実用的な発現効率とハプテン結合能を併せ持つ変異体の創製が今後の課題である.

  • Research Products

    (14 results)

All 2009 2008

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results) Presentation (8 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Development of an LC-ESI-MS/MS method for the determi-nation of histamine : Application to the quantitative measurement of histamine degranulation by KU812 cells2009

    • Author(s)
      Junko Koyama
    • Journal Title

      Journal of Chromatography B 877

      Pages: 207-212

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cleavable" hapten-biotin conjuigates : Preparation and use for the generation of anti-steroid single-domain antibody fragments2009

    • Author(s)
      Norihiro Kobayashi
    • Journal Title

      Analytical Biochemistry 387

      Pages: 257-266

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Correlation between reduction potentials and inhibitions of Epstein-Barr virus activation by anthraquinone derivative2008

    • Author(s)
      Junko Koyama
    • Journal Title

      Bioorganic & Medicinal Chemical Letters 18

      Pages: 4106-4109

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Correlation between oxidation potentials and inhibitory effects on Epstein-Barr virus activation of flavonoids2008

    • Author(s)
      Junko Koyama
    • Journal Title

      Cancer Letters 263

      Pages: 61-66

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Anti-estradiol-17βsingle-chain Fv fragments : Generation, characterization, gene randomization, and optimized phage display2008

    • Author(s)
      Norihiro Kobayashi
    • Journal Title

      Steroids 73

      Pages: 1485-1499

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] LC-APCI-MS/MSによるTaxus yunnanensis中の成分研究2009

    • Author(s)
      森田いずみ, 小山淳子, 清水真希, 小林典裕, 信川真智子, 信川真貴子
    • Organizer
      日本薬学会第129年会
    • Place of Presentation
      京 都
    • Year and Date
      2009-03-27
  • [Presentation] プロトベルベリン型アルカロイドの生物活性と還元電位との相関性について2009

    • Author(s)
      小山淳子, 森田いずみ, 小林典裕, 岩佐衣子, 守安正恭
    • Organizer
      日本薬学会第129年会
    • Place of Presentation
      京 都
    • Year and Date
      2009-03-27
  • [Presentation] 可溶型抗ステロイド単一ドメイン抗体の調製と諸性質2009

    • Author(s)
      中野正典, 番園恵理佳, 大山浩之, 小林典裕
    • Organizer
      日本薬学会第129年会
    • Place of Presentation
      京 都
    • Year and Date
      2009-03-26
  • [Presentation] 変異抗体フラグメントを用いるエストラジオール免疫測定法の感度と特異性2009

    • Author(s)
      多賀詩織, 大山浩之, 加藤芳徳, 小林典裕
    • Organizer
      日本薬学会第129年会
    • Place of Presentation
      京 都
    • Year and Date
      2009-03-26
  • [Presentation] 抗ステロイド抗体scFvの抗原結合活性に及ぼす枠組み領域置換の効果2009

    • Author(s)
      大山浩之, 小林典裕
    • Organizer
      日本薬学会第129年会
    • Place of Presentation
      京 都
    • Year and Date
      2009-03-26
  • [Presentation] LC-APCI-MS/MSを用いたエモジンのRaji細胞内代謝物の同定2009

    • Author(s)
      清水真希, 小山淳子, 竹内敦子, 森田いずみ, 小林典裕
    • Organizer
      日本薬学会第129年会
    • Place of Presentation
      京 都
    • Year and Date
      2009-03-26
  • [Presentation] プロトベルベリン類によるEpstein-Barr virus活性抑制と還元電位との相関性について2008

    • Author(s)
      小山淳子, 森田いずみ, 小林典裕, 徳田春邦
    • Organizer
      第67回日本癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      名古屋
    • Year and Date
      2008-10-29
  • [Presentation] 教育講演1. 免疫測定法の実際 : 特異抗体の創製を中心に2008

    • Author(s)
      小林典裕
    • Organizer
      第48回日本臨床化学会年次学術集会
    • Place of Presentation
      浜松
    • Year and Date
      2008-08-29
  • [Book] スタンダード薬学シリーズ2. 物理系薬学IV. 演習編(日本薬学会編)2008

    • Author(s)
      小林典裕
    • Total Pages
      5
    • Publisher
      東京化学同人

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Published: 2010-06-11   Modified: 2012-09-24  

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