肝癌由来増殖因子と受容体の発現・活性化調節による肝癌増殖の制御

2008 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19590795
• Research Institution: Hyogo College of Medicine
• Principal Investigator: 中村 秀次 Hyogo College of Medicine, 医学部, 准教授 (20237423)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 今西 宏安 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (60340957) ; 榎本 平之 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (40449880)
• Keywords: 肝癌由来増殖因子 / HDGF / HDGF受容体 / 肝細胞癌 / DNA chip / shRNA / luciferase assay / HDGF promoter / ELISA

Research Abstract

1. HDGF受容体の同定と細胞内シグナル伝達機構の解析。既知の増殖因子受容体の一つをHDGF受容体の候補として同定した。HDGF受容体を欠損する細胞を用いて、HDGF受容体を遺伝子導入したHDGF受容体高発現株を作製した。HDGF受容体高発現細胞抽出液を用いた抗HDGF抗体による免疫沈降(1P)後抗HDGF受容体抗体によるWestern blot、また抗HDGF受容体抗体によるIP後抗HDGF抗体によるblotにて、相互の結合を確認した。ヨードラベルHDGFを用いて、HDGF受容体高発現株および親株でScatchard解析し、HDGFの特異的結合を確認した。HDGF受容体高発現株および肝癌細胞株を用いて、HDGF投与により細胞増殖が促進されること、HDGF受容体蛋白がリン酸化され、細胞内のERKがリン酸化されることを明らかにした。2.HDGF高発現、または発現低下により変動する遺伝子の解析。HDGF高発現HepG2肝癌細胞を用いて、細胞レベルおよびヌードマウスで形成される腫瘍における遺伝子発現変化をDNA chipにて解析した。両者において発現誘導される遺伝子として6遺伝子、抑制される遺伝子として4遺伝子が認められた。3.HDGF発現抑制によるin vivoでの肝癌増殖抑制の解析。HDGFshRNAによるHDGFノックダウンSK-Hep-1細胞株を用いて、in vivoおよびin vitroで細胞増殖能を検討した。HDGFノックダウン細胞は軟寒天培地で足場非依存性増殖能は抑制された。HDGFノックダウン細胞ではMock細胞に比し、ヌードマウス皮下での腫瘍形成能が抑制された。以上より、HDGF発現抑制により肝癌増殖を制御できる可能性が示唆された。4.HDGFのPromoter領域の解析。HDGF promoter luciferaseアッセイ系を用い、IFNによるHDGFの発現抑制を明らかにした。ビタミンK2がpromoter領域-1〜-150に作用してHDGF発現を抑制することを明らかにした。HDGFの発現制御法を探索する上で重要である。5.肝癌患者血漿中HDGF濃度の測定。我々が確立したHDGFELISA測定系を用い、慢性肝疾患患者血漿中HDGF濃度を測定した。肝癌患者では、慢性肝炎、肝硬変患者に比し、有意に陽性率および血漿HDGF値が高値であった。腫瘍サイズが大きいほど、病期が進行するほど高値を示した。AFP陰性肝癌の約半数に血漿HDGFの上昇が認められた。血漿HDGFは、特にAFPを補完する腫瘍マーカーとして有用であると思われる。

Research Products

• [Journal Article] Involvement of hepatoma-derived growth factor in the growth inhibition of hepatocellular carcinoma cells by vitamin K2 (2009)
  • Author(s): Yamamoto T, Nakamura H, Liu W, Cao K, et al.
  • Journal Title: Journal of Gastroenterology 44 Pages: 228-235
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Extraordinary pleiotropy of protein kinase CK2 revealed by weblogo phosphoproteome analysis (2009)
  • Author(s): Salvi M, Sarno S, Cesaro L, Nakamura H, Pinna LA
  • Journal Title: Biochimica et Biophysica Acta 1793 Pages: 847-859
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Hepatoma-derived growth factor is induced in liver regeneration (2009)
  • Author(s): Enomoto H, Nakamura H, Liu W, Yamamoto T, et al.
  • Journal Title: Hepatology Research 39(in press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Role of hepatom a-derived growth factor in cancer. (2009)
  • Author(s): Nakamura H, Liu W, et al.
  • Journal Title: Trends in Cancer Research (in press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A higher expression of hepatoma-derived growth factor in hepatocellular carcinoma cells and more tumor growth in vivo (2009)
  • Author(s): Liu W, Nakamura H, Deng H, Enomoto H, et al.
  • Journal Title: Trends in Cancer Research (in press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 胎生期未分化肝細胞の増殖におけるHDGF (Hepatoma-derived growth factor)の役割 (2009)
  • Author(s): 榎本平之, 中村秀次, 今西宏安, 康典利, 岩田恵典, 他
  • Journal Title: 消化器疾患におけるTranslational Research Pages: 229-230
• [Presentation] 肝細胞癌の増殖におけるHDGF (Hepatoma-derived growth factor)の役割 (2008)
  • Author(s): 榎本平之, 中村秀次, 今西宏安, 康典利, 岩田恵典, 齊藤正紀, 下村壯治, 飯島尋子, 西口修平
  • Organizer: 国際科学振興財団第16回浜名湖シンポジウム
  • Place of Presentation: 浜松
  • Year and Date: 20081220-21
• [Presentation] Involvement of hepatoma-derived growth factor (HDGF) in the proliferation of hepatoma cells (2008)
  • Author(s): Enomoto H, Nakamura H, Liu W. Yamamoto T, et al.
  • Organizer: 59^<th> American association for The Study of Liver Disease (AASLD) The Liver Meeting
  • Place of Presentation: Sanfrancisco
  • Year and Date: 20081031-20081104
• [Presentation] Involvement of hepatoma-derived growth factor in the growth inhibition of hepatocellular carcinoma cells by vitamin K2 (2008)
  • Author(s): Nakamura H, Yamamoto T Liu W, Enomoto H, et al.
  • Organizer: 59^<th> American association for The Study of Liver Disease (AASLD) The Liver Meeting
  • Place of Presentation: Sanfrancisco
  • Year and Date: 20081031-20081104
• [Presentation] 肝癌患者血漿中のHDGF濃度の測定 (2008)
  • Author(s): 中村秀次, 山本晃久, 劉衛東, 他
  • Organizer: 第44回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 20081028-20081030
• [Presentation] 未分化幹細胞の増殖因子Hepatoma-derived growth factorは、oval cellに発現しその増殖に関与する(シンポジウム) (2008)
  • Author(s): 榎本平之, 中村秀次, 西口修平
  • Organizer: 第12回日本肝臓学会大会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 20081001-20081004
• [Presentation] 肝癌細胞に対するHDGFの抗アポトーシス活性 (2008)
  • Author(s): 劉衛東, 中村秀次, H. Deng, 山本晃久, 吉川昌平, 岩田恵典, 榎本平之, 康典利, 齊藤正紀, 今西宏安, 下村壯治, 飯島尋子, 西口修平
  • Organizer: 第12回日本肝臓学会大会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 20081001-04
• [Presentation] 肝癌患者における肝癌由来増殖因子HDGFの血漿濃度の測定意義 (2008)
  • Author(s): 中村秀次, 山本晃久, 榎本平之, 吉川昌平, 片瀬竜司, 池田直人, 秦一美, 坂井良行, 岩田恵典, 康典利, 齋藤正紀., 今西宏安, 下村壯治, 飯島尋子, 西口修平
  • Organizer: 第44回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: 愛媛
  • Year and Date: 20080605-06
• [Presentation] ビタミンK2による肝癌細胞のTyro 3受容体の発現抑制 (2008)
  • Author(s): 劉衛東, 中村秀次, 山本晃久, 吉川昌平, 榎本平之, 康 典利, 岩田恵典, 齋藤正紀, 今西宏安, 下村壯治, 飯島尋子, 西口修平
  • Organizer: 第44回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: 愛媛
  • Year and Date: 20080605-06
• [Presentation] Hepatoma-derived growth factor(HDGF)の肝癌細胞増殖促進作用 (2008)
  • Author(s): 榎本平之, 中村秀次, 山本晃久, 劉衛東, 今西宏安, 齋藤正紀, 吉川昌平, 坂井利行, 山田大輔, 中野宏明, 片瀬竜司, 池田直人, 秦一美, 岩田恵典, 康典利, 下村壯治, 飯島尋子, 西口修平
  • Organizer: 第44回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: 愛媛
  • Year and Date: 20080605-06
• [Book] Methods of Cancer Diagnosis, Therapy and Prognosis (Ed. Hayat MA) Volume V, Chapter 26 : Hepatocellular carcinoma : Prognosis using hepatoma-derived growth factor immunohistochemistry (2009)
  • Author(s): Nakamura H, Yoshida K, Tomita Y.
  • Total Pages: 333-342
  • Publisher: Elsevier/Academic Press
• [Book] Methods of Cancer Diagnosis, Therapy and Prognosis (Ed. Hayat MA) Volume III, Chapter 18 : Pancreatic cancer : Hepatoma-derived growth factor as a prognostic factor (2008)
  • Author(s): Tomita Y, Uyama H, Nakamura H.
  • Total Pages: 183-189
  • Publisher: Elsevier/Academic Press
• [Book] Current Research in Hepatology Vol 2 : Impact of hepatoma-derived growth factor on hepatocellular carcinoma (2008)
  • Author(s): Nakamura H.
  • Total Pages: 45-56
  • Publisher: Research Media
• [Patent(Industrial Property Rights)] 新規肝癌マーカー (2008)
  • Inventor(s): 中村秀次, 大本安一, 他
  • Industrial Property Rights Holder: 兵庫医科大学, 大塚製薬(株)
  • Industrial Property Number: 診断方法、2007-209544国際特許分類C12N15/09
  • Filing Date: 2008-08-07
  • Overseas