C型肝炎ウイルス複製に関与する宿主因子の同定とウイルス複製機構の解析

2007 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19590799
• Research Institution: National Institute of Infectious Diseases
• Principal Investigator: 相崎 英樹 National Institute of Infectious Diseases, ウイルス第二部, 主任研究官 (00333360)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鈴木 哲朗 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 室長 (00250184)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / 複製複合体 / プロテオミックス / サブゲノムレプリ / 界面活性剤不溶性膜分画 / 分子シャペロン / NS5B蛋白

Research Abstract

HCVは感染細胞内でウイルス蛋白と宿主因子からなる複製複合体を形成し効率良くウイルス複製を行っていると考えられている。本研究はプロテオミックス技術により、HCV複製複合体(RC)を構成する宿主因子を同定し、その機能を解析することを目的とした。
サブゲノムレプリコン(genotype 1b)を有するHuh7細胞からHCVRCを含む界面活性剤不溶性膜分画を抽出し、Huh7細胞と比較した(プロテオーム解析1)。また、HCV RNA複製効率は宿主細胞の増殖性と相関することが知られているので、フルゲノムレプリコンを含むHuh-7細胞から膜分画を対数増殖期と非増殖期から回収し、比較した(プロテオーム解析2)。
解析1の結果、約1500個の蛋白が検出され、62個がレプリコン細胞で2倍以上蛋白量が増加しており、それらはHeat shock protein、Chaperone、Enzyme、Receptor signaling complex、Ubiquitin proteasome system proteinなどに分類された。解析2の結果、約1300個の蛋白が検出され、45個が高HCV複製期に1.5倍以上蛋白量が増加していた。解析1、2のいずれでも増加した蛋白として、分子シャペロンT-complex polypeptide 1 ring complex(CCT)のサブユニットなどが同定された。
HCV複製の分子機構を解明し関与する宿主因子を同定、解析することは新規治療法開発につながることが期待できる。我々はプロテオミックス技術を利用してHCV RCを構成すると考えられる複数の宿主因子を同定した。中でも分子シャペロンCCT5はNS5B蛋白と結合することによりウイルスRNA複製を調節する可能性が考えられた。

Research Products

• [Journal Article] A Critical Role of Virion-Associated Cholesterol and Sphingolipid in Hepatitis C Virus Infection (2008)
  • Author(s): Aizaki H, Morikawa K, Fukasawa M, Hara H, Inoue Y, Tani H, Saito K, Nishijima M, Hanada K, Matsuura Y, Lai MM, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • Journal Title: J Virol. (In press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Dynamic behavior of hepatitis C virus quasispecies in a long-term culture of the three-dimensional radial-flow bioreactor system. (2008)
  • Author(s): Murakami K, Inoue Y, Hmwe SS, Omata K, Hongo T, Ishii K, Yoshizaki S, Aizaki H, Matsuura T, Shoji I, Miyamura T, Suzuki T
  • Journal Title: J Virol Methods 148 Pages: 174-181
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A Single Amino Acid Mutation in Hepatitis C Virus NS5A Disrupting FKBP8 Interaction Impairs Viral Replication. (2008)
  • Author(s): Okamoto T, Omori H, Kaname Y, Abe T, Nishimura Y, Suzuki T, Miyamura T, Yoshimori T, Moriishi K, Matsuura Y.
  • Journal Title: J. Virol. 82 Pages: 3480-3489
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Trans-encapsidation of hepatitis C virus subgenomic replicon RNA with viral structure proteins. (2008)
  • Author(s): Ishii K, Murakami K, Hmwe SS, Zhang B, Li J, Shirakura M, Morikawa K, Suzuki R, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun. (In press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Transcriptomic comparison of human hepatoma Huh-7 cell clones with different hepatitis C virus replication efficiencies. (2007)
  • Author(s): Inoue Y, Murakami K, Hmwe SS, Aizaki H, Suzuki T.
  • Journal Title: Jpn J Infect Dis. 60 Pages: 173-178
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Hepatitis C viral life cycle. (2007)
  • Author(s): Suzuki T, Ishii K, Aizaki H, Wakita T
  • Journal Title: Adv Drug Deliv Rev 59 Pages: 1200-1212
• [Journal Article] Molecular biology of hepatitis C virus. (2007)
  • Author(s): Suzuki T., Aizaki H, Murakami K, Shoji I, Wakita T
  • Journal Title: J Gastroenterol 42 Pages: 411-423
• [Journal Article] Human Butyrate-Induced Transcript 1 Interacts with Hepatitis C Virus NS5A and Regulates Viral Replication. (2007)
  • Author(s): Taguwa S, Okamoto T, Abe T, Mori Y, Suzuki T, Moriishi K, Matsuura Y.
  • Journal Title: J. Virol. 82 Pages: 2631-2641
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] E6AP ubiquitin ligase mediates ubiquitylation and degradation of hepatitis C virus core protein. (2007)
  • Author(s): Shirakura M, Murakami K, Ichimura T, Suzuki R, Shimoji T, Fukuda K, Abe K, Sato S, Fukasawa M, Yamakawa Y, Nishijima M, Moriishi K, Matsuura Y, Wakita T, Suzuki T, Howley PM, Miyamura T, Shoji I.
  • Journal Title: J. Virol. 81 Pages: 1174-1185
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Involvement of the PA28gamma-dependent pathway in insulin resistance induced by hepatitis C virus core protein. (2007)
  • Author(s): Miyamoto H, Moriishi K, Moriya K, Murata S, Tanaka K, Suzuki T, Miyamura T, Koike K, Matsuura Y.
  • Journal Title: J. Virol. 81 Pages: 1727-1735
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Critical role of PA28gamma in hepatitis C virus-associated steatogenesis and hepatocarcinogenesis. (2007)
  • Author(s): Moriishi K, Mochizuki R, Moriya K, Miyamoto H, Mori Y, Abe T, Murata S, Tanaka K, Miyamura T, Suzuki T, Koike K, Matsuura Y.
  • Journal Title: Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 104 Pages: 1661-1666
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] GBV-B as a pleiotropic virus:distribution of GBV-B in extrahepatic tissues in vivo. (2007)
  • Author(s): Ishii K, lijima S, Kimura N, Lee Y, J, Ageyama N, Yagi S, Yamaguchi K, Maki N, Mori K, Yoshizaki S, Machida S, Suzuki T, Iwata N, Sata T, Terao K, Miyamura T, Akari H.
  • Journal Title: Microbes Infect. 9 Pages: 515-521
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Rapid genome sequencing of RNA viruses. (2007)
  • Author(s): Mizutani T, Endoh D, Shirato K, Shimizu H, Fukushi S, Saijo M, Sakai K, Kwang L, Ito M, Nerome R, Takasaki T, Ishii K, Suzuki T, Kurane I, Morikawa S, Nishimura H.
  • Journal Title: Emerg.Infect.Dis. 13 Pages: 322-324
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The NS3 helicase and NS5B-to-3'X regions are important for efficient hepatitis C virus strain JFH-1 replication in Huh7 cells. (2007)
  • Author(s): Murayama A, Date T, Morikawa K, Akazawa D, Miyamoto M, Kaga M, Ishii K, Suzuki T, Kato T, Mizokami M, Wakita T.
  • Journal Title: J.Virol. 81 Pages: 8030-8040
  • Peer Reviewed
• [Presentation] The cholesterol and sphingolipids of hepatitis C virus particles play critical roles in the viral infectivity (2007)
  • Author(s): Aizaki H, Fukasawa M, et. al.
  • Organizer: The 58^<th> annual meeting of the American association for the study of liver diseases
  • Place of Presentation: Boston
  • Year and Date: 20071100
• [Presentation] Analysis of NS5A region important for hepatitis C virus particle production. (2007)
  • Author(s): Masaki T, Suzuki T, et. al.
  • Organizer: The 58^<th> annual meeting of the American association for the study of liver diseases
  • Place of Presentation: Boston
  • Year and Date: 20071100
• [Presentation] Production of infectious hepatitis C virus by using RNA polymerase I-mediated transcription. (2007)
  • Author(s): Masaki T, Suzuki T, et. al.
  • Organizer: 第66回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 20071000
• [Presentation] 遺伝子型2a/2b間でのキメラウイルスの作製および性状解析 (2007)
  • Author(s): 伊達 朋子、鈴木 哲朗, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 20071000
• [Presentation] C型肝炎ウイルスコア蛋白質のシグナルペプチドペプチダーゼによるプロセシングの生物学的意義. (2007)
  • Author(s): 森 嘉生、鈴木 哲朗, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 20071000
• [Presentation] HCV JFH-1株の複製および感染性ウイルス粒子形成に重要な領域の解析 (2007)
  • Author(s): 村山 麻子、鈴木 哲朗, 他.
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 20071000
• [Presentation] HCVコア蛋白と結合する新規宿主因子hnRNP H1/H2の同定と相互作用解析 (2007)
  • Author(s): 阿部 克俊、鈴木 哲朗, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 20071000
• [Presentation] 新規阻害剤探索のためのHCV感染増殖アッセイ系の構築とその評価 (2007)
  • Author(s): 上西 理恵、鈴木 哲朗, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 20071000
• [Presentation] 細胞培養系により産生されたHCVウイルスの免疫原性に関する検討 (2007)
  • Author(s): 尾見 法昭、鈴木 哲朗, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 20071000
• [Presentation] C型肝炎ウイルス脂質成分の感染における役割 (2007)
  • Author(s): 相崎 英樹、鈴木 哲朗, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 20071000
• [Presentation] Critical roles of virion-associated cholesterol and sphingolipids in the viral infectivity. (2007)
  • Author(s): Aizaki H, Suzuki T, et. al.
  • Organizer: 14^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • Place of Presentation: Glasgow,UK
  • Year and Date: 20070900
• [Presentation] Analysis of NS5A region for hepatitis C virus particle production. (2007)
  • Author(s): Masaki T, Suzuki T, et. al.
  • Organizer: 14^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • Place of Presentation: Glasgow,UK
  • Year and Date: 20070900
• [Presentation] Cellular vimentin content affects the protein level of hepatitis C virus core protein and the activity of hepatitis C virus production in cultured cells. (2007)
  • Author(s): Fukasawa M, Suzuki T, et. al.
  • Organizer: 14^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • Place of Presentation: Glasgow,UK
  • Year and Date: 20070900
• [Presentation] An adaptive mutation in E2 glycoprotein allows an efficient production of HCV particles with the epitope-tagged envelope. (2007)
  • Author(s): Takahashi H, Suzuki T, et. al.
  • Organizer: 14^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • Place of Presentation: Glasgow,UK
  • Year and Date: 20070900
• [Presentation] 脂質のC型肝炎ウイルス感染、粒子形成における役割 (2007)
  • Author(s): 相崎 英樹、原弘 道、森川 賢一、宮村 達男、脇田 隆字、鈴木 哲朗
  • Organizer: 第43回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 20070500
• [Book] C型肝炎に関する最近の情報 (2008)
  • Author(s): 相崎 英樹、鈴木 哲朗、多田 有希、岡部 信彦、脇田 隆字
  • Total Pages: 21-23
  • Publisher: 結核予防会機関誌「複十字」