2007 Fiscal Year Annual Research Report
心不全発症過程における成人マウス心筋からの転写因子GATA4複合体の精製と解析
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19590842
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| Research Institution | Department of Clinical Research, National Hospital Organization Kyoto Medical Center |
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Principal Investigator |
森本 達也 Department of Clinical Research, National Hospital Organization Kyoto Medical Center, 展開医療研究部, 主任研究員 (50390779)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
塩井 哲雄 京都大学, 医学研究科循環器内科学, 講師 (50360095)
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| Keywords | 心筋細胞肥大 / プロテオミクス / 転写因子 / トランスジェニックマウス / GATA-4 |
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| Research Abstract |
(1)心筋細胞肥大に関するGATA4複合体の精製
我々は、心筋細胞肥大の核内情報経路において、心筋特異的GATA転写因子がキー蛋白の1つであることをみいだした。心筋特異的蛋白の機能的コンプレックスを精製し、心筋細胞肥大における詳細なメカニズムを解明する目的で、FLAG-HA2つのタグのついたGATA4を心筋過剰発現させたトランスジェニックマウスの作成を行っている。さらには、GATA4の最も強力なコアクチベーターであるp300に、FLAG-HA 2つのタグをつけ心筋細胞に過剰発現させたトランスジェニックマウスも作成した。
(2)GATA4結合蛋白の機能解析
GATA4複合体を網羅的に解析するために、FLAG-HAの二重タグの付いたマウスGATA4のcDNAをレトロウイルスを用いてHeLa細胞に発現させ、核蛋白を抽出した。その後、FLAGとHAの抗体をもちいて、GATA-4複合体のタンデム・アフィニティー精製をおこない、結合蛋白をCBB染色にて確認した。マススペクトメトリーと蛋白データーベースから、GATA4複合体を構成する蛋白を網羅的に解析し、73個の結合蛋白を同定した。現在、興味有る結合蛋白の発現量、GATA4との結合の変化、心筋細胞特異的マーカーの発現や心筋特異的転写因子(β-ミオシン重鎖、エンドセリン1、ANP(Aタイプ利尿ペプチド)など)のプロモーターの転写活性の変化をルシフェラーゼアッセイにて測定している。結合蛋白の野生型やさまざまな変異体のリコンビナント蛋白を昆虫細胞や大腸菌を用いて作成中で、その結合が直接的なものか他の因子を必要とするかを検討し、ドメインマッピングも行う予定である。
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[Presentation] Curcumin, a Natural p300-specific Histone Acetyltransferase Inhibitor, Prevents the Development of Heart Failure in Rats2008
Author(s)
Tatsuya Morimoto, Yoichi Sunagawa, Teruhisa Kawamura, Tomohide Takaya, Hiromichi Wada, Shoichi Miyamoto, Atsushi Nagasawa, Shigeki Yanagi, Ryota Sugimoto, Akira Marui, Masashi Komeda, Masatoshi Fujita, Akira Shimatsu, Toru Kita, Koji Hasegawa
Organizer
Keystone Symposia
Place of Presentation
Colorado, USA
Year and Date
20080114-18
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[Presentation] A Natural p300-specific Histone Acetyltransferase Inhibitor, Crucumin, Prevents the Development of Heart Failure in vivo2007
Author(s)
Yoichi Sunagawa, Tatsuya Morimoto, Teruhisa Kawamura, Tomohide Takaya, Shoichi Miyamoto, Hiromichi Wada, Akira Shimatsu, Masatoshi Fujita, Toru Kita, Koji Hasegawa
Organizer
第11回日本心不全学会学術集会
Place of Presentation
浦安
Year and Date
20070909-10
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