2007 Fiscal Year Annual Research Report
Desert Hedgehog遺伝子変異による末梢神経障害の病態解明と治療法開発
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19591000
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
梅原 藤雄 Kagoshima University, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (20271140)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
橋口 照人 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 准教授 (70250917)
有村 公良 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 准教授 (20159510)
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| Keywords | Desert hedgehog / 遺伝子治療 / 末梢神経障害 |
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| Research Abstract |
目的:
本研究は、Dhh発現プラスミドの移入による末梢神経障害の新たな治療法の開発を目的とする。
方法:
1. ヒトDhh遺伝子発現プラズミド(phDhh)の作成
ヒトDhh遺伝子amino-terminal domain coding sequenceをpCMV-Script PCR mammalian expression vector (Stratedgene)に組み込んだ。以下の3種類のプラズミドを作成した。86:Dhh N末端がストップコドン、87:Dhh N末端にHisを6個標識、最後がストップコドン、Dhh-myc:Dhh N末端にmycを標識し、最後がストップコドン。
2. Dhh蛋白発現及び分泌の確認
3種のDhh遺伝子を組み込んだpCMV-Script PCR mammalian expression vectorをCOS細胞にtransfectionし、そのcell lysate及びculture supernatantを用いて、Western blotを行った。
結果及び考察
Cell lysate及びculture supernatantにおいて、Western blotで約19kDaの蛋白を確認した。これらは抗His抗体及び抗Myc抗体によってそれぞれ特異的に認識された。この結果により、このDhh発現ベクターをtransfectionした細胞において、Dhh蛋白(N末端)を産生・分泌することを確認した。今後、このプラスミド(phDhh)を種々の末梢神経障害モデル(局所挫滅モデル、糖尿病性末梢神経障害、実験的自己免疫性末梢神経炎)に対して、局所注入することにより、神経再生効果について検討する予定である。
結輪
Dhh発現プラズミド(phDhh)の作成に成功した。このプラズミドのtrasfectionにより、Dhhの産生・分泌が誘導出来る。
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[Journal Article] Inclusion body myositis associated with human T-lymphotropic virus-type I infection: eleven patients from an endemic area in Japan.2008
Author(s)
Matsuura E, Umehara F*, Nose H, Higuchi I, Matsuoka E, Izumi K, Kubota R, Saito M, Izumo S, Arimura K, Osame M.
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Journal Title
J Neuropathol Exp Neurol 67
Pages: 41-49
Peer Reviewed
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[Journal Article] Expression of the heparin-binding growth factor midkine in the cerebrospinal fluid of patients with neurological disorderS.2008
Author(s)
Yoshida Y, Ikematsu S, Muramatsu H, Sakakima H, Mizuma N, Matsuda F, Sonoda K, Umehara F, Ohkubo R, Matsuura E, Goto M, Osame M, Muramatsu T.
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Journal Title
Intern Med 47
Pages: 83-89
Peer Reviewed
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