2007 Fiscal Year Annual Research Report
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19591703
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
森 健太郎 Juntendo University, 医学部, 教授 (30200364)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
長田 秀夫 順天堂大学, 医学部, 講師 (20384050)
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| Keywords | 神経膠腫 / 骨髓間質細胞 / Bystander効果 |
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| Research Abstract |
自殺遺伝子のひとつであるherpes simplex virus l thymidine kinase(HSVtk)遺伝子をglioma細胞に導入し、pro-drugであるganciclovir(GCV)を投与するとglioma細胞内のthymidine kinaseによって活性型に変換され細胞は死滅するが、HSVtkを持たない周辺のglioma細胞も死滅することが知られており、これをbystander効果という。このbystander効果が、HSVtkを導入した骨髄間質細胞(BMSC)とHSVtkを持たないghoma細胞との間にもbystander効果が認められるかを平成19年度はinvitroで検討した。HSV-tk遺伝子を導入した骨髄問質細胞(BMSCtk)を作成した。Glioma細胞はLacZ遺伝子を持つ9L/LacZ ghoma細胞を使用した。まず、9L/LacZ glioma細胞とBMSCtk細胞をco-cultureし、24時間後に培養液にGCVを加え培養後、DNA染色を施行し蛍光顕微鏡にて観察すると、HSV-tkを持たないgloma細胞の核も断片化しapotosisを来たしたことが判明した。さらに、このbystander効果を定量的に評価するために9L/LacZ glioma細胞が持つR-galactosidase活性を目安とした。すなわち、細胞溶解液にONGPを加え、そのODをspectrophotometerにて測定し細胞生存率を算出した。その結果、glioma細胞の細胞生存率はBMSCtk細胞の比率が高い程、またGCVの濃度が高い程に反比例して低下することが定量的に証明された。以上より、HSVtkを導入した骨髄間質細胞とHSVtkを持たないglioma細胞との間にもbystander効果が存在することが証明された。
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