2008 Fiscal Year Annual Research Report
Smadリンカー領域リン酸化の上皮ー間葉系移行と線維化での役割の研究
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19592036
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
雑賀 司珠也 Wakayama Medical University, 医学部, 教授 (40254544)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山中 修 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (50254545)
岡田 由香 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (50264891)
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| Keywords | 水晶体上被細胞 / 網膜色素被細胞 / 繊維芽細胞 / トランスフォーミング成長因子 / Smad / リン酸化 / 上皮-間葉系移行 / 繊維化 |
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| Research Abstract |
培養細胞の研究では、培養網膜色素上皮細胞株ARPE-19、マウス水晶体上皮細胞株aTN4と野生型マウス線維芽細胞で、TGFb存在下でのSmadミドルリンカー領域のリン酸化およびC末端領域のリン酸化での各種シグナルの役割と上皮-間葉系移行の状態の検討を行った。その際の線維化関連遺伝子発現をreal-time RT-PCRとウエスタンブロットで検討する。各種の特異的シグナル阻害薬を用いた。上皮-間葉系移行に伴ってSmadリンカーのリン酸化が高進したが、それはMAPK阻害薬で抑制された。JNK、p38阻害薬の効果はUO126よりも弱かった。マウス線維芽細胞では、JNKの役割が大きいように予備的結果を得た。
in vivoの研究では、ヒト後発白内障組織でのSmad2/3のミドルリンカー領域のリン酸化およびC末端領域のリン酸化を免疫組織か学的に検索した。術後ぼ創傷治癒過程にある水晶体上皮細胞で、上皮形態を維持している部分では、C末端のリン酸化、上皮-間葉系移行を起こしている部分では、C末端とリンカーの両者のリン酸化が検出された。
ラット水晶体の穿孔外傷後の創傷治癒モデルを用いた。dominant negative-p38MAPK、dominant negative-JNK、dominant negative-MAPKのアデノウイルスベクターによる遺伝子導入の水晶体上皮細胞でのSmad2およびSmad3のC末端とミドルリンカー領域のリン酸化の時問経過を免疫組織化学的に検討した。さらに水晶体上皮細胞の線維化で最も重要な現象である上皮-間葉系移行の状態を平滑筋アクチンの発現、上皮-間葉系移行に関与する転写因子であるSnail、各種サイトカインや細胞外マトリックス成分の発現から検討した。免疫組織化学とreal-time RT-PCRを用いた。上皮-間葉系移行による遺伝子発境はSmadリンカーのリン酸化の抑制と同時に、JNK、p38、マPKのいずれを阻害しても観察されたという予備的結果を得た。
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[Journal Article] Epithelial-mesenchymal transition as a therapeutic target for prevention of oculartissue fibrosis.2008
Author(s)
Saika S, Yamanaka O, Flanders KC, Okada Y, Miyamoto T, Sumioka T, Shirai K, Kitano A, Miyazaki K, Tanaka S, Ikeda K.
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Journal Title
Endocr Metab Immune Disord Drug Targets 8(1)
Pages: 69-76
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