LPSによるB細胞の増殖活性に関与する細胞内リン酸化基質タンパク質の同定

2008 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19592129
• Research Institution: Iwate Medical University
• Principal Investigator: 木村 重信 Iwate Medical University, 歯学部, 教授 (10177917)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 根本 優子 長崎大学, 医歯薬学総合研究科, 准教授 (10164667)
• Keywords: LPS / B細胞 / 細胞内チロシンリン酸化反応

Research Abstract

本年度は,昨年度同定したLPS刺激後のB細胞の増殖過程で特異的にリン酸化が起こるチロシンリン酸化基質タンパク質,p25の性状について詳細に検討するとともに,サイトカイン産生との関連性について検討した.その結果
1.抗p25抗体(抗Ran抗体)を用いた二次元ウエスタンブロッティングから,B細胞には無刺激で複数のp25のスポットが観察されること,LPS刺激によりその総量が増加し,且つその最も酸性側のスポットの量が増加することが明らかとなった.
2.C3H/HeNおよびC3H/HeJマウスB細胞に対し増殖活性を示すP.gingivalis LPS,ならびにC3H/HeNマウスB細胞にのみ増殖活性を示すE.coli LPSを用いた検討から,上記のp25のスポットの変化は,LPS刺激後のB細胞の増殖反応と一致することが明らかとなった.
3.LPS刺激後のB細胞内チロシンリン酸化反応阻害剤であるハービマイシン処理を行うと,いずれのマウスB細胞についても増殖反応およびp25のスポットの変動(総量および最も酸性側のスポット量の増加)が完全に抑制されたことから,p25のチロシンリン酸化が増殖反応に関与することが強く示唆された.
4.LPSによるB細胞のサイトカイン産生との関連性について3種類のMAPキナーゼ(ERK1/2,p38,JNK)の阻害剤を用いて検討した結果,P.gingivalis LPS刺激後のp25のスポットの変動はサイトカイン(IL-6,TGF-β)産生と関与することが示唆された.
これらの結果より,B細胞内チロシンリン酸化基質タンパク質,p25の総量および最も酸性側のスポット量の増加は,P.gingivalis LPSによるB細胞の増殖反応およびサイトカイン産生に関与していることが強く示唆された.

Research Products

• [Journal Article] Determination of three amino acids that caused the alteration of proteolytic activities of staphylococcal glutamyl endopeptidases. (2009)
  • Author(s): Nemoto, T. K., Ono, T., Shimoyama, Y., Kimura, S., Ohara-Nemoto, Y.
  • Journal Title: Biol. Chem. 390 Pages: 277-285
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Gene expression analyses of human macrophage phagocytizing sub-m titanium particles by allergy DNA chip (Genopal^<TM>). (2009)
  • Author(s): Taira, M., Nezu, T., Sasaki M., Kimura, S., Kagiya, T., Harada, H., Narushima T., Araki, Y.
  • Journal Title: Biomed. Mater. Eng. 19(印刷中)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] An Escherichia coli expression system for glutamyl end peptidases optimized by complete suppression of auto-degradation. (2008)
  • Author(s): Nemoto, T. K., Ono, T., Shimoyama, Y., Kimura. S., Ohara-Nemoto. Y
  • Journal Title: Anal. Biochem. 381 Pages: 74-80
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Homologous and heterologous expression and maturation processing of extreacellular glutamyl endopeptidase of Staphylococcus epidermidis. (2008)
  • Author(s): Ohara-Nemoto. Y., Ono, T., Shimoyama. Y., Kimura, S., Nemoto, T. K.
  • Journal Title: Biol. Chem. 389 Pages: 1209-1217
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] TEMEDX observation of micro-beads of magnetically activated cell sorting (MACS) system and separation trial of mouse mesenchymal stem cells from bone marrow cells by MACS system. (2008)
  • Author(s): Taira, M., Sasaki, K, Saitoh, S., Nezu, T., Kagiya, T., Harada, H., Sasaki M., Kimura, S., Hirata, I., Araki, Y.
  • Journal Title: J. Oral Tissue Engin. 6 Pages: 33-40
  • Peer Reviewed
• [Presentation] The production of secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) from gingival epithelial cells in response to Porphyromounas gingivalis lipopoly saccharides. (2009)
  • Author(s): Ishikawa, T., Ohara-Nemoto, Y., Tajika, S., Sasaki, M., Kimura, S.
  • Organizer: The 3rd International Symposium for Interface Oral Health Science
  • Place of Presentation: Sendai, Japan
  • Year and Date: 2009-01-16
• [Presentation] A novel aspartate-specific dipeptidylpeptidase produced from Porphyromonas endodontalis. (2009)
  • Author(s): Haraga, H., Ohara-Nemoto, Y., Nemoto, T. K., Shimoyama. Y., Sasaki, M., Kimura, S.
  • Organizer: The 3rd International Symposium for Interface Oral Health Science
  • Place of Presentation: Sendai. Japan
  • Year and Date: 2009-01-16
• [Presentation] Rapid identification of HACEK group bacteria using 16S rRNA gene PCR-RFLP. (2009)
  • Author(s): Sasaki, M., Tajika. S., Kodama, S., Shimoyama, Y., Kimura, S.
  • Organizer: The 3rd International Symposium for Interface Oral Health Science
  • Place of Presentation: Sendai. Japan
  • Year and Date: 2009-01-16
• [Presentation] Three amino acid substitutions are suffcient for the alteration of the activities among three members of Staphylococcal glutamic-acid-specific endopeptidase. (2008)
  • Author(s): Nemoto, T. K., Ono, T., Shimoyama, Y., Kimura, S., Ohara-Nemoto. Y.
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-12
• [Presentation] Effects of high-concentration ID10% copper ions on macrophage. (2008)
  • Author(s): Taira, M., Kagiya, T., Harada, H., Sasaki, M., Kimura, S., Araki, Y.
  • Organizer: Annual Meeting 2008 of the Academy of Dental Materials.
  • Place of Presentation: Wurzburg, Germany
  • Year and Date: 2008-10-02
• [Presentation] Gene expression analyses of human macrophage phagocytizing sub-μutitanium particles by allergy DNA chip (Genopal^<TM>). (2008)
  • Author(s): Taira, M., Nezu, T., Sasaki, M., Kimura. S., Kagiya, T., Harada, H., Narushima, T., Araki, Y.
  • Organizer: International Symposium on Nanotoxi-clogy Assessment and Biomedical, Environmental Application of Fine Particles and Nanotubes ISNT2008.
  • Place of Presentation: Sapporo, Japan.
  • Year and Date: 2008-06-16
• [Presentation] Maturation processing of glutamyl endopeptidase of Staphylococcus epidermidis. (2008)
  • Author(s): Ohara-Nemoto, Y., Ono, T., Shimoyama, Y. Kimura, S., Nemoto, T. K.
  • Organizer: 108th General Meeting of the American Society for Microbiology.
  • Place of Presentation: Boston, USA.
  • Year and Date: 2008-06-05
• [Presentation] Acid tolerance of Steptococcus anginosus. (2008)
  • Author(s): Sasaki, M., Tajika, S., Kodama, S., Kimura S.
  • Organizer: 18th European Congress of Clinical Microbiology.
  • Place of Presentation: Barcelona, Spain.
  • Year and Date: 2008-04-20