2007 Fiscal Year Annual Research Report
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19650084
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
岡部 繁男 The University of Tokyo, 大学院・医学系研究科, 教授 (60204012)
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| Keywords | シナプス / 全反射顕微鏡 / 一分子 / 光スイッチ / 足場蛋白質 |
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| Research Abstract |
中枢神経シナプスは神経細胞間の情報伝達の場であり、そこに局在する分子の分布を高い解像度で測定する事は、シナプスでの構造と機能の関連を理解する上できわめて重要である。中枢神経系の興奮性シナプスは、そのサイズが数ミクロンと小さいが、STORM顕微鏡を利用して高解像度の分子分布を知ることが出来れば、シナプス内部構造についての理解が格段に進展すると考えられる。この目的の為、本年度は以下の実験を行った。
1.STORM顕微鏡の作成 対物レンズ型の全反射顕微鏡を使用して、一分子蛍光像を取得し、光スイッチとして
DronpaおよびDendra-2を用いてこれらの蛋白質を細胞内に発現した標本を利用した。水銀ランプの紫外光により光スイッチをオンにして、一分子に由来する蛍光像を取得、その重心位置を推定した。全ての蛍光スポットが消退した後、再度紫外光による光スイッチの活性化を行い、このサイクルを反復して繰り返し一分子由来の蛍光像を取得した。現在のセットアップで比較的短時間の光スイッチのオン・オフによる位置の推定は可能であるが、長期間の標本のドリフトなどによるXYおよびZ方向の絶対位置の変化が測定に大きく影響することがわかった。
2.光スイッチとシナプス後肥厚部分子の融合蛋白質の機能評価 光スイッチとして使用予定であるDronpaおよび
Dendra-2についてシナプス後肥厚部分子との融合蛋白質を作成し、神経細胞内での局在を解析した。DronpaについてはPSD-95などのシナプス蛋白質との融合分子は内在性のPSD-95とその分布が良く一致し、局在マーカーとして使用することが可能であると考えられる。Dendra-2については単独の分子としては蛍光強度が強く、利用しやすいが、融合蛋白質として利用可能なものはまだ得られていない。この点については次年度に検討する予定である。
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[Journal Article] Regulation of dendritic spine morphology by an NMDA receptor-associated Rho GTPase-activating protein, p250GAP2008
Author(s)
Nakazawa, T., Kuriu, T., Tezuka, T., Umemori, H., Okabe, S., and Yamamoto, T.
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Journal Title
Journal of Neurochemistry in press(印刷中)(掲載確定)
Peer Reviewed
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[Journal Article] Co-localization of a novel transcriptional repressor simiRP58 with RP582008
Author(s)
Takahashi, A., Hirai, S., Ohtaka-Maruyama, C., Miwa, A., Hata, Y., Okabe, S. and H. Okado
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Journal Title
Biochemical and Biophysical Research Communications 368
Pages: 637-642
Peer Reviewed
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[Journal Article] The Secl/Munc18 family protein, VPS-45, is required for RAB-5-dependent endocytic trafficking in C. elegans2007
Author(s)
Gengyo-Ando, K., Kuroyanagi, H., Kobayashi, T., Murate, M., Fujimoto, K., Okabe. S. and S. Mitani
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Journal Title
EMBO Reports 8
Pages: 152-157
Peer Reviewed
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